商陆皂苷甲抗炎免疫调节作用分子机制的研究

论文摘要

商陆总皂苷是从中国商陆的块根中提取的三帖皂苷,（囊癖灵）治疗子宫内膜异位症已获专利,治疗卵巢囊肿和乳腺增生已获准进入Ⅲ期临床。商陆皂苷甲（Esculentoside A,EsA）是商陆中含量最高的皂苷。以前的很多研究表明,EsA对多种实验性急慢性炎症和自身免疫性疾病具有显著的作用,对体液免疫和过度激活的巨噬细胞有显著的抑制作用,能使巨噬细胞吞噬能力下降,能抑制淋巴细胞和巨噬细胞释放多种细胞因子和介质,如白介素-1（Interleukin-1,IL-1）、白介素-2（Interleukin-2,IL-2）、白介素-6（Interleukin-6,IL-6）、肿瘤坏死因子（Tumornecrosis factor,TNF）、前列腺素E2（Prostaglandin E2,PGE2）等,但是,对其抗炎免疫调节作用机制的认识,远远未能令人满意。小鼠基因芯片检测了EsA作用下静息和ConA活化的小鼠胸腺细胞早期敏感反应基因表达谱的变化,芯片结果显示EsA可调节胸腺细胞一氧化氮（nitric oxide,NO）、基质金属蛋白酶、活化STAT抑制蛋白（protein inhibitor of activated STAT protein 1,PIAS1）等相关的基因靶群。这些基因靶群的发现为我们寻找EsA的分子机制提供了重要的线索。基于EsA作用的主要靶细胞是激活状态下的巨噬细胞以及前期基因芯片初筛发现的可能与EsA抗炎免疫相关的基因靶群,本课题选择小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞为靶细胞,进一步研究EsA对巨噬细胞产生NO、金属蛋白酶和活化STAT抑制蛋白表达的影响。主要研究结果如下:（1）采用Griess法测定NO活性,EsA（2.5-10 mg/L）能显著抑制脂多糖（LPS）激活小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞释放NO;采用Western Blot方法发现,EsA能显著抑制LPS诱导增加的一氧化氮合酶（iNOS）蛋白表达。（2）采用实时定量PCR检测,EsA（2.5-10 mg/L）能显著抑制LPS诱导增加的基质金属蛋白酶-9表达,但对基质金属蛋白酶抑制因子TIMP-2表达无影响;EsA5和10 mg/L能显著增加TGF-β1表达;（3） EsA显著抑制LPS激活的小鼠巨噬细胞FK506结合蛋白FKB1A和环亲和素PPIA以及活化STAT抑制蛋白PIAS1的mRNA水平。以上结果表明,ESA可能通过抑制炎症介质NO和MMP-9的产生,促进免疫抑制因子TGF-β1的产生,来发挥抗炎免疫调节作用。此外,调控与炎症免疫密切相关的调节分子FKB1A、PPIA和PIAS1活性可能是其重要的分子作用机制。这些结果为阐明EsA的抗炎免疫调节分子机制提供了重要的资料。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 缩略词表
• 一、前言
• 二、实验材料与方法
• （一） 实验材料
• （二） 实验仪器
• （三） 实验方法
• 三、实验结果
• （一） EsA对LPS刺激RAW264.7细胞释放NO的影响
• （二） EsA对LPS刺激RAW264.7细胞iNOS蛋白表达的影响
• （三） EsA对MMP-9和TIMP-2表达的影响
• （四） EsA对TGF-β1表达的影响
• （五） EsA对FKB1A和PPIA表达的影响
• （六） EsA对PIAS1表达的影响
• 四、讨论
• 五、结论
• 六、参考文献
• 七、文献综述
• 在读期间参与工作
• 致谢