论文摘要
泛素-蛋白酶体通路介导的细胞蛋白降解是一个复杂、缜密的过程,这种有高度选择性的蛋白质降解途径在细胞周期、基因转录及表达、抗原递呈等方面发挥重要的调控作用。但是到目前为止,对于泛素-蛋白酶体通路形成的分子机理及功能还不是很清楚。26S蛋白酶体是由多个亚基组成的复合体,这个复合体是两部分组成,一部分是20S降解复合体,另一部分是20S降解复合体（CP）两端的19S调节复合体（RP）。20S降解复合体是底物蛋白质的水解中心,由7个α亚基和7个β亚基,组成α1-7β1-7β1-7α1-7的桶状结构。在哺乳动物细胞中还有3个可以被干扰素（IFNγ）诱导的β亚基,β1i,β2i,β5i,可以替换β1,β2,β5形成免疫蛋白酶体,主要在抗原递呈中起作用。19S调节复合体至少有17个亚基组成,包含两个亚结构,分别是“盖子”（lid）和“基底部”（base）。“盖子”是由一些non-ATPase酶活性的亚基组成,“盖子”能识别泛素化的底物,把底物带入26S蛋白酶体中,并且能使泛素化的底物去泛素,对泛素进行再循环;“基底部”由6个具有ATPase酶活性的亚基和3个non-ATPase酶活性的亚基组成,主要功能是使底物蛋白去折叠和变性,使底物蛋白质进入20S降解复合体,进行底物蛋白质的水解。肝脏是人体的第一大器官,是物质代谢、能量转换及供应的枢纽,在人类生命活动中占有重要地位.构建人肝脏细胞的蛋白质网络图谱,对了解肝脏疾病的发生机理和治疗有着重大的意义。我们通过RT-PCR的方法,从人肝脏组织中获得26S蛋白酶体亚基的全长ORF,把这些亚基ORF分别克隆到酵母双杂交的载体上,转入酵母S.cerevisiaeAH109中进行亚基间相互作用分析。我们总共得到了34个26S蛋白酶体亚基的全长ORF,检测了1156对26S蛋白酶体亚基间相互作用实验,观察到112对阳性结果,其中有18对亚基间的相互作用是双向的;同时我们使用GST-pull down的方法,验证了将近10%的酵母双杂交实验结果;还把表达不同的荧光标记的相互作用亚基共转染到HeLa细胞中,观察亚基的共定位。我们在不同系统中验证26S蛋白酶体亚基间的相互作用,证明了我们的实验结果。我们酵母双杂交阳性结果的41%是在原来文献中有报道的,这更加证明了我们结果的正确性。同时我们还得到一些新型的26S蛋白酶体亚基间相互作用,这为了解人26S蛋白酶体的功能奠定了基础。