落葵多糖的提取分离与药理学研究

论文摘要

植物多糖（polysaccharide）是近年来活性物质研究的活跃领域之一。本研究以落葵（Basella rubra L.）为实验材料,采用热水浸提法和超声波提取法进行落葵多糖（PBRL）提取,在此基础上对落葵多糖的抗氧化、抗肿瘤、抗疲劳等功能进行了初步研究,主要结果如下:1.落葵多糖的提取效率:实验研究了料液比、温度、时间对多糖提取率的影响。结果表明提取时间和提取温度为影响落葵多糖提取的主要因素。在本实验设计的条件下,其最佳提取工艺为:料液比1:50,提取时间5h,提取温度85℃,多糖提取率最大为4.01%。超声波提取结果显示,在温度70℃,超声功率160w,时间120min时可达最大,其提取率为17.02%,是热水浸提法的4.25倍,这表明超声提取法是一种更为有效的落葵粗多糖提取方法。2.落葵多糖的分离纯化:采用DEAE-Sepharose-FF离子交换层析纯化落葵粗多糖,共得到六个组分。最佳分离条件为:上样浓度12mg/ml,洗脱速度1.6ml/min,pH7.6 Tris-HCl缓冲液制备样品,使用0～0.6 mol/L NaCl浓度梯度洗脱和再生。六个组分经苯酚-硫酸法检测糖和紫外检测法检测蛋白质,在波长280nm处检测到蛋白信号,与糖信号部分重合,由此推测,落葵中提取的活性物质为可能为糖蛋白或蛋白多糖。3.落葵多糖的抗氧化活性:实验分别采用AP-TEMED体系、邻二氮菲（1,10-phenanthroline）-Fe2+比色法测定了多糖对O2-·自由基、羟基自由基的清除作用。同时,通过红细胞溶血实验测定了多糖对H2O2损伤保护效应。结果显示,在本实验设计条件下,落葵多糖对O2-·和·OH的最大清除率分别达到54.32%和52.94%。对H2O2诱导红细胞氧化溶血的最大抑制率达到55.76%。4.落葵多糖的免疫活性、抗肿瘤及抗疲劳效应:实验采用碳粒廓清实验检测PBRL免疫吞噬功效,采用免疫器官称重法测定对正常小鼠免疫器官的影响,采用S180动物肿瘤模型检测PBRL抑制肿瘤的功效,采用小鼠游泳实验测PBRL的抗疲劳功效。结果表明:落葵多糖高剂量组对小鼠胸腺指数和脾指数影响大,低剂量组则作用较小;落葵多糖中高剂量组都显示出很好的抑瘤作用;PBEL各剂量组对小鼠的抗疲劳能力有显著的提高作用。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1.前言
• 1.1 落葵的生理特性
• 1.2 国内外多糖研究概况
• 1.3 多糖的药理活性
• 1.3.1 免疫增强作用
• 1.3.2 多糖的抗肿瘤活性
• 1.3.3 抗氧化活性
• 1.3.4 降血糖和降血脂活性
• 1.3.5 抗病毒、抗菌消炎作用
• 1.3.6 其它药理活性
• 1.4 本课题的研究意义和主要内容
• 2.材料与方法
• 2.1 落葵多糖的提取
• 2.1.1 实验材料
• 2.1.2 水提醇沉法
• 2.1.3 超声波提取
• 2.1.4 多糖测定
• 2.1.5 多糖提取率的计算
• 2.2 落葵粗多糖的分离、纯化
• 2.2.1 实验材料
• 2.2.2 实验方法
• 2.2.2.1 离子交换层析介质的选择
• 2.2.2.2 缓冲液的选择及配制
• 2.2.2.3 DEAE-Sepharose-FF的预处理
• 2.2.2.4 上样及洗脱
• 2.2.2.5 层析流程
• 2.3 落葵粗多糖抗氧化研究
• 2.3.1 实验材料
• 2.3.2 实验方法
• 2^-·清除作用（AP-TEMED测定法）'>2.3.2.1 落葵多糖对O₂^-·清除作用（AP-TEMED测定法）
• 2O₂/Fe²⁺体系法)'>2.3.2.2 落葵多糖对·OH清除作用(H₂O₂/Fe²⁺体系法)
• 2O₂诱导小白鼠红细胞氧化溶血实验'>2.3.2.3 多糖抑制H₂O₂诱导小白鼠红细胞氧化溶血实验
• 2^-清除作用的体外实验'>2.3.2.4 多糖对NO₂^-清除作用的体外实验
• 2.4 落葵多糖的药理学研究
• 2.4.1 实验材料
• 2.4.2 实验方法
• 2.4.2.1 碳粒廓清法
• 2.4.2.2 免疫器官法
• 2.4.2.3 抗肿瘤功能
• 2.4.2.4 抗疲劳能力测定
• 3.结果与分析
• 3.1 落葵粗多糖的提取与测定
• 3.1.1 提取时间对落葵粗多糖提取率的影响
• 3.1.2 温度对落葵多糖提取率的影响
• 3.1.3 料液比对落葵多糖提取率的影响
• 3.1.4 落葵粗多糖提取条件的优化
• 3.1.5 超声波法提取法与水提醇沉法比较分析
• 3.2 落葵多糖的分离
• 3.2.1 上样量与上样浓度对分离效果的影响
• 3.2.2 pH值对洗脱效果的影响
• 3.2.3 分离回收的落葵多糖检测
• 3.3 落葵多糖的抗氧化研究
• 2^-·和·OH的清除作用'>3.3.1 落葵多糖对O₂^-·和·OH的清除作用
• 2O₂诱导的小白鼠红细胞氧化溶血抑制作用'>3.3.2 落葵多糖对H₂O₂诱导的小白鼠红细胞氧化溶血抑制作用
• 2^-清除作用'>3.3.3 落葵多糖对NO₂^-清除作用
• 3.4 落葵多糖对动物免疫、抗疲劳及抗肿瘤作用的初步评价
• 3.4.1 落葵多糖对小白鼠免疫功能的影响
• 3.4.2 落葵多糖对小白鼠器官重量的影响
• 3.4.3 落葵多糖对小白鼠抗肿瘤能力的影响
• 3.4.4 落葵多糖对小鼠抗疲劳能力的影响
• 4.讨论
• 4.1 落葵多糖的提取
• 4.2 落葵多糖的分离
• 4.3 落葵多糖的功能
• 参考文献
• 致谢
• 附录Ⅰ实验主要试剂及其来源:
• 附录Ⅱ主要试剂配制方法
• 附录Ⅲ实验所用主要仪器
• 附录Ⅳ在读期间发表的论文