猪miR-483-3p调控脂肪沉积相关基因研究

猪miR-483-3p调控脂肪沉积相关基因研究

论文摘要

MicroRNAs (miRNAs)是一类长约22nt的内源性非编码小分子RNA,能通过与基因mRNA 3’非编码区结合而抑制靶基因mRNA及蛋白水平的表达。miR-483-3p是从人胎肝组织中分离的一高表达miRNA,位于IGF2内含子内,肿瘤细胞中miR-483-3p能通过靶向BBC3/PUMA基因协同IGF2促进细胞增殖并保护细胞免于凋亡,但miR-483-3p在组织生长发育调控中的作用研究很少,本研究旨在探索猪miR-483-3p调控脂肪沉积相关基因中的作用。取得的主要成果如下:1、通过对猪miR-483-3p和IGF2基因表达谱分析发现,猪miR-483-3p和IGF2基因表达趋势一致,说明猪niR-483-3p和IGF2可能受到共调控,基因功能相关。2、通过对猪miR-483-3p初级转录本SNP寻找与性状关联分析发现,该SNP位点与多个免疫和脂肪沉积相关性状显著关联,说明猪miR-483-3p在免疫和脂肪沉积中都有一定的作用,同时暗示猪miR-483-3p功能多样性。3、为了探索miR-483-3p在生长发育中的调控机制,通过靶基因预测软件HOCTAR预测:niR-483-3p靶基因筛选出PPARBP和CTNNB1两个与与脂肪分化密切相关的基因,验证发现,miR-483-3p能特异性结合到PPARBP和CTNNB1基因3UTR区域,并且3T3L 1细胞中过表达miR-483-3p, CTNNB1基因mRNA和蛋白质水平都呈现明显的下调趋势,但PPARBP基因仅mRNA水平下调,蛋白水平的变化不明显。4、在瘦肉精饲喂恩施黑猪4种组织中检测miR-483-3p、IGF2基因、CTNNB1基因和IGFBP3基因的mRNA相对表达水平发现,肝脏和肌肉组织中IGF2基因的表达量并未发生变化,但miR-483-3p和CTNNB1基因的表达上调;心脏和脂肪组织中,miR-483-3p、IGF2和CTNNB1基因的表达均上调,并且肌肉组织中IGFBP3基因有明显下调趋势。总之,miR-483-3p能够直接靶向脂肪沉积相关基因CTNNB1,并且在调控过程中miR-483-3p存在依赖和非依赖IGF2两种表达调控机制。

论文目录

  • 摘要
  • ABSTRACT
  • 缩略词表
  • 第一章 前言
  • 1 研究问题的由来
  • 2 文献综述
  • 2.1 miRNAs的发现和分类
  • 2.2 miRNAs的生物合成和加工
  • 2.3 miRNAs的功能
  • 2.4 内含子miRNAs的表达调控
  • 2.5 内含子miRNAs靶基因预测方法
  • 2.6 microRNAs与SNPs
  • 2.7 miRNAs与脂肪沉积
  • 2.8 影响脂肪沉积相关基因及其通路
  • 2.9 克伦特罗功能及其危害
  • 2.10 miR-483-3p及IGF2相关基因研究进展
  • 3 本研究的目的和意义
  • 第二章 材料和方法
  • 1 材料
  • 1.1 样品
  • 1.2 菌株、载体和细胞系
  • 1.3 主要仪器设备
  • 1.4 主要试剂
  • 1.5 主要试剂的配制
  • 1.6 主要分子生物学软件和网站
  • 2 试验方法
  • 2.1 组织总RNA提取方法
  • 2.2 总RNA完整性及浓度的检测
  • 2.3 总RNA的反转录
  • 2.4 用于实验的引物设计
  • 2.5 PCR扩增反应
  • 2.6 双荧光素酶报告载体psi-check2载体的构建
  • 2.7 双荧光素酶报告基因验证miR-483-3p预测靶基因结合位点
  • 2.8 Western blot蛋白凝胶电泳验证miR-483-3p预测靶基因
  • 2.9 细胞培养
  • 2.10 性状关联分析
  • 第三章 结果
  • 1 MIR-483-3P与其宿主基因IGF2功能比较研究
  • 1.1 猪miR-483-3p的定位
  • 1.2 猪miR-483-3p与IGF2组织表达谱
  • 1.3 miR-483-3p初级转录本SNP位点性状关联分析
  • 2 MIR-483-3P靶基因预测及验证
  • 2.1 miR-483-3p靶基因预测及其筛选
  • 2.2 双荧光素酶报告基因载体PSI-CHECK2对miR-483-3p靶基因的验证
  • 1前体脂肪细胞中过表达miR-483-3p,PPARBP和CTNNB1 mRNA水平的检测'>2.3 3T3L1前体脂肪细胞中过表达miR-483-3p,PPARBP和CTNNB1 mRNA水平的检测
  • 1前体脂肪细胞中过表达miR-483-3p,PPARBP和CTNNB1蛋白水平的检测'>2.4 3T3L1前体脂肪细胞中过表达miR-483-3p,PPARBP和CTNNB1蛋白水平的检测
  • 3 瘦肉精饲喂恩施黑猪MIR-483-3P及相关基因MRNA水平检测
  • 3.1 瘦肉精饲喂后miR-483-3p及其宿主基因IGF2组织的表达趋势变化
  • 3.2 不同组织饲喂瘦肉精后miR-483-3p及其相关基因mRNA水平变化
  • 第四章 讨论
  • 1 猪MIR-483-3P与其宿主基因IGF2功能相关性
  • 2 内含子MIRNAs靶基因的预测及验证
  • 3 内含子MIRNAs的表达调控
  • 第五章 小结
  • 1 本研究的主要成果
  • 2 本研究的创新点和特色
  • 3 本研究不足之处及进一步工作建议
  • 参考文献
  • 附录
  • 在读期间已发表或拟发表论文题录
  • 致谢
  • 相关论文文献

    • [1].MiR-483-3P下调RIOK3蛋白表达促进神经母细胞瘤的增殖和迁移[J]. 临床小儿外科杂志 2016(02)
    • [2].外周血miR-483-3p联合血栓弹力图对老年下肢骨折合并冠心病患者发生深静脉血栓的风险评估作用[J]. 中华实用诊断与治疗杂志 2020(12)
    • [3].miR-483-3p对结直肠癌DLC1基因表达的影响[J]. 胃肠病学 2014(07)
    • [4].外周血miR-483-3p联合D-二聚体检测对下肢深静脉血栓的诊断价值[J]. 安徽医学 2018(05)
    • [5].miR-483-3p靶向CD44抑制EGFR突变肺癌的作用研究[J]. 现代生物医学进展 2019(14)

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