论文题目: 新叔铵类药物对梭曼膦酰化AChE增强重活化作用机理的GC/MS研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 药物分析
作者: 王清清
导师: 阮金秀,谢剑炜,顾明松
关键词: 梭曼,气相色谱质谱,乙酰胆碱酯酶,肟类重活化剂,叔铵类重活化剂,重活化,老化,变构剂,胆碱酯酶抑制剂
文献来源: 中国人民解放军军事医学科学院
发表年度: 2005
论文摘要: 梭曼抑制乙酰胆碱酯酶(AChE)后,生成的膦酰化乙酰胆碱酯酶随时间延长将发生两种主要形式的转化:一种是自发或在药物作用下的脱膦酰基重活化过程,中毒酶恢复活力,重活化过程的主要产物是甲基膦酸频哪酯(PMPA);另一种是脱烷基老化过程,中毒酶失去重活化能力,主要产物是甲基膦酸(MPA)。梭曼膦酰化AChE的迅速老化和难重活化一直是梭曼难防难治的主要原因和抗毒药物研发的难点之一。即使像HI-6这样有效的重活化剂对梭曼膦酰化酶的重活化作用也是有限的。近年来,国外研究者发现一些季铵类化合物可显著提高肟类的重活化作用,与此同时,我所研究发现叔铵类药物L-1978和L-1655等也能增强肟类的重活化作用,因此,揭示药物增强重活化的作用机理将对梭曼抗毒药物的设计开发具有重大意义。 在评价梭曼抗毒药物的重活化效率时,通常人们采用酶活力测定法和同位素测定法等研究抗毒药物增强重活化的作用机理,但结果并不十分理想。本课题首次采用GC/MS等现代仪器分析技术,建立药物作用于梭曼膦酰化AChE后定量释放出PMPA和MPA的样品处理和检测方法,研究药物对梭曼膦酰化酶重活化过程和老化过程的影响,探寻新叔铵类药物对梭曼膦酰化AChE增强重活化的可能作用机理。 论文分为三章: 第一章前言,简要介绍了重活化剂发展的主要历程,影响膦酰化AChE重活化的主要因素,以及肟类重活化剂的几种作用机理;介绍了我所对梭曼膦酰化AChE重活化药物和作用机理的研究现状和存在问题,并在此基础上提出了论文的研究目的和研究内容。
论文目录:
英文缩略词表
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英文摘要
第一章 前言
1.重活化剂发展的简要历程
1.1 经典重活化剂
1.2 非季铵类重活化剂
1.3 叔铵型重活化荆
2.乙酰胆碱酯酶的结构
3.影响膦酰化AChE重活化的因素
3.1 酶源的影响
3.2 毒剂类型的影响
3.3 中毒时间的影响
3.4 重活化剂结构的影响
4.肟类重活化剂的作用机理
4.1 酶活性中心构象的改变
4.2 变构剂和膦酰化酶的老化
4.3 肟基的位置
4.4 肟基进攻的轨道
5.我所对梭曼膦酰化AChE重活化剂以及作用机理的研究现状
6.本课题的研究目的和研究内容
6.1 课题目的
6.2 课题研究内容
第二章 梭曼降解产物GC／MS分析方法的建立及其在膦酰化酶中含量的测定
1.引言
1.1 游离态降解产物的GC／MS分析
1.1.1 水样中毒剂降解产物的检测
1.1.2 土壤样品中毒剂降解产物的检测
1.1.3 生物样品中毒剂降解产物的检测
1.2 生物加合物的GC／MS分析
1.3 MPA的GC／MS分析
1.4 本章的研究工作
2.实验部分
2.1 实验仪器和设备
2.2 实验药品和试剂
2.3 实验方法
2.3.1 市售Sigma AChE(Type Ⅵ-S from electrophorus electricus)基本性质考察
2.3.2 GC／MS检测条件
2.3.3 游离态PMPA和MPA提取方法比较(标准加入法)
2.3.4 梭曼膦酰化AChE定量释放出的PMPA和MPA提取方法
2.3.5 重活化产物标准曲线的制备方法
2.3.6 老化产物标准曲线的制备方法
2.3.7 PMPA和MPA的回收率和重现性
3 结果和讨论
3.1 Sigma乙酰胆碱酯酶基本性质考察
3.1.1 聚丙稀酰胺凝胶电泳分析
3.1.2 紫外吸收光谱法测定蛋白含量
3.1.3 微量羟胺比色法测定AChE比活
3.2 梭曼重活化产物(PMPA)和老化产物(MPA)GC／MS检测方法的确定
3.2.1 衍生化试剂的选择
3.2.2 气相色谱分离条件的优化
3.2.3 PMPA和MPA衍生物的质谱解析
3.2.4 衍生化物稳定性考察
3.3 水样中同时提取梭曼重活化产物和老化产物样品处理方法的建立
3.3.1 水样中PMPA和MPA溶剂提取方法的研究
3.3.2 水样中PMPA和MPA固相萃取方法的研究
3.4 人血浆样品中同时提取梭曼重活化产物和老化产物固相萃取方法的建立
3.4.1 蛋白对固相萃取效率的影响
3.4.2 去蛋白溶剂／溶液的选择
3.4.3 SAX柱洗脱条件的优化
3.4.4 标准曲线和检测限
3.4.5 方法的回收率和精密度
3.5 梭曼膦酰化AChE定量释放出的重活化产物和老化产物样品处理方法的建立
3.5.1 梭曼对电鳐AChE的抑制曲线
3.5.2 梭曼磷酰化酶用量的考察
3.5.3 梭曼和梭曼膦酰化酶的分离
3.5.4 膦酰化AChE酶解条件的确定
3.5.5 金属离子对衍生化的影响
3.5.6 药物对衍生化的影响
3.5.7 重活化产物(PMPA)和老化产物(MPA)的标准曲线和最低定量限
3.5.8 方法的回收率和精密度
3.6 SAX-GC／MS方法和酶活力测定方法比较
3.6.1 HI-6对梭曼膦酰化AChE的重活化作用
3.6.2 LuH6对梭曼膦酰化AChE的重活化作用
4 本章小结
第三章 GC／MS法研究新叔铵类药物对梭曼膦酰化AChE增强重活化的作用机理
1.引言
2.实验部分
2.1 药品和仪器
2.2 实验方法
2.3 数据处理
3.实验结果
3.1 叔铵类药物对梭曼膦酰化AChE重活化过程的影响
3.1.1 L-1978对梭曼膦酰化AChE重活化作用的影响
3.1.2 L-1655对梭曼膦酰化AChE重活化作用的影响
3.2 胆碱酯酶抑制剂对梭曼膦酰化AChE重活化过程的影响
3.2.1 8151和eserine单用时的重活化作用
3.2.2 8151和eserine对LüH6重活化作用的影响
3.2.3 8151和eserjne对HI-6重活化作用的影响
3.3 变构剂对梭曼膦酰化AChE重活化过程的影响
3.3.1 C10和C6单用时的重活化作用
3.3.2 C10和C6对LüH6重活化作用的影响
3.3.3 C10和C6对HI-6重活化作用的影响
3.4 药物对梭曼膦酰化AChE老化过程的影响
3.4.1 叔铵类药物对梭曼膦酰化AChE老化过程的影响
3.4.2 胆碱酯酶抑制剂对梭曼膦酰化AChE老化过程的影响
3.4.3 变构剂对梭曼膦酰化AChE老化过程的影响
4.本章小结
药物增强重活化作用机理的探讨
1.抑酶作用和增强重活化作用
2.变构调节和增强重活化作用
3.增强重活作用和延缓老化作用
4.L-1978的总体评价
结论
参考文献
博士期间发表文章情况
致谢
附录
发布时间: 2005-09-05
参考文献
- [1].乙酰胆碱酯酶加合物质谱定量方法及在重活化剂抗毒效能评价中的应用[D]. 闫珑.中国人民解放军军事医学科学院2016
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