阿托伐他汀调节PI3K/Akt/eNOS途径对UUO小鼠管周微血管密度的影响及机制

论文摘要

目的:探讨阿托伐他汀（atrovastatin, ATO）调节磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶-B/内皮型一氧化氮合酶（phosphatidylinositol -3 kinase/protein kinase-B/endothelial nitric oxide synthase, PI3K/Akt/eNOS）途径对单侧输尿管梗阻（unilateral ureteral obstruction, UUO）肾间质纤维化（renal interstitium fibrosis, RIF）小鼠管周微血管（peritubular capillary, PTC）密度的影响及机制。方法:96只SPF级雌性昆明小白鼠随机分为3组,每组32只:①单侧输尿管结扎组（UUO组）:行右侧输尿管结扎术;②假手术组（Sham组）:进入腹腔后游离右侧输尿管但不结扎;③单侧输尿管结扎+阿托伐他汀干预组（ATO组）:结扎右侧输尿管后,予阿托伐他汀5mg.kg-1.d-1灌胃直至处死。分别于实验第7、14、21、28天每组随机抽取8只小鼠,颈椎脱臼处死,留取血液和肾脏标本:①检测血尿素氮、肌酐水平。②流式细胞检测外周血单个核细胞中CD133+/VEGFR2+双阳性细胞比例。③H E、Masson染色后光镜下观察肾组织形态改变,并进行肾间质纤维化评分。④免疫组化检测肾间质Akt、p-Akt和eNOS的表达。⑤免疫组化检测肾间质CD34+细胞数目以评估PTC密度。结果:①血尿素氮、肌酐水平:整个实验过程中三组小鼠血尿素氮、肌酐未见明显变化,各组之间比较差异均无统计学意义（P>0.05）。②外周血单个核细胞中CD133+/VEGFR2+双阳性细胞比例:造模前随机抽取8只小鼠检测外周血CD133+/VEGFR2+双阳性细胞比例作为正常对照组。实验后三组小鼠外周血单个核细胞中CD133+/VEGFR2+双阳性细胞比例均于第1周末升高达峰值,较正常对照组明显升高（P<0.05）,第2周后下降;Sham组第2、3、4周较正常对照组无明显变化（P>0.05）,UUO组第2周末将至正常水平以下,第3、4周较正常对照组明显降低（P<0.05）,ATO组第2、3、4周较正常对照组明显升高（P<0.05）。③肾间质纤维化评分:Sham组肾间质纤维化评分在各时间点无明显变化,UUO组和ATO组肾间质纤维化评分均随着造模时间延长逐渐加剧,整个实验过程中ATO组较同期UUO组明显降低,但仍较同期Sham组升高,差异有统计学意义（P<0.05）。④Akt和p-Akt的表达:Sham组肾间质Akt、p-Akt的表达未见明显变化,UUO组第1周肾间质Akt、p-Akt较Sham明显升高,差异有统计学意义（P<0.05）,第2、3、4周表达逐渐下降,第3、4周较Sham组显著降低（P<0.05）;ATO组肾间质Akt、p-Akt的表达在第1周末达高峰,以后随造模时间延长逐渐降低,各时间点均高于同期Sham组和UUO组（P<0.05）。⑤eNOS的表达:Sham组肾间质eNOS的表达未见明显变化,UUO组和ATO组肾间质eNOS的表达均随着造模时间延长逐渐降低,第2、3、4周均明显低于Sham组（P<0.05）,第2、3、4周各时间点ATO组较UUO组明显升高（P<0.05）。⑥PTC密度计数:Sham组肾间质PTC密度未见明显变化,UUO组和ATO组肾间质PTC密度均随着造模时间延长逐渐降低,第2、3、4周均明显低于Sham组（P<0.05）,第2、3、4周各时间点ATO组较UUO组明显升高（P<0.05）。相关分析显示UUO组和ATO组以下指标之间存在直线相关关系:p-Akt与EPCs之间呈直线正相关（r=0.902, P<0.01）;EPCs与PTC密度之间呈直线正相关（r=0.720, P<0.01）;p-Akt与eNOS之间呈直线正相关（r=0.569, P<0.01）;eNOS与PTC密度之间呈直线正相关（r=0.762, P<0.01）。结论:①阿托伐他汀可以增加UUO小鼠肾间质PTC密度,从而延缓RIF。②阿托伐他汀增加UUO小鼠肾间质PTC密度可能是通过激活PI3K/Akt/eNOS信号转导途径实现的。③阿托伐他汀调节PI3K/Akt/eNOS通路动员EPCs促进微血管再生和改善内皮功能促进内皮修复是它增加PTC密度从而延缓RIF的可能机制。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 缩略词表
• 前言
• 实验材料和方法
• 实验结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 致谢