家兔胚胎分割的研究

论文摘要

本试验采用FSH、PMSG、LH、hCG四种激素的不同组合对家兔进行超数排卵,并对超数排卵所采集到的8-细胞、桑椹胚、早期囊胚分别进行徒手分割和显微分割,分割后的半胚在三种不同的培养液（含20%小牛血清的mPBS、DMEM、TCM-199）于37.5°C、5%CO2饱和湿度的培养箱中培养。试验结果如下:1 FSH + hCG组合中的60单位FSH + 75单位hCG组合效果最佳:排卵点、平均回收胚胎数、平均可用胚胎数分别为33.0±4.60、27.92±4.46、21.75±4.33,均显著高于40单位和80单位FSH处理组（P<0.05）。2不同激素的对比试验中,FSH+ hCG组合的平均回收胚胎数和平均可用胚胎数（27.92±4.46、21.75±4.33）显著高于（P<0.05） FSH+LH （23.20±3.88、17.9±2.69）与PMSG + hCG组合（22.38±4.50、17.25±4.33）,排卵点差异不显著（P>0.05）。3比较三种不同时期胚胎的分割效果及其半胚在三种不同的培养液（含20%小牛血清的mPBS、TCM-199、DMEM）中的发育情况。结果表明:早期囊胚分割成功率高于8-细胞胚胎分割成功率（82.18% vs 73.40%）,经检验差异显著（P<0.05）,早期囊胚与桑椹胚分割成功率差异不显著（P>0.05）,桑椹胚与8-细胞胚胎分割成功率差异也不显著（P>0.05）。8-细胞、桑椹胚、早期囊胚经分割后半胚体外培养发育至囊胚的比率三者依次增加（34.78% vs 57.17% vs 61.44%）,经检验8-细胞与桑椹胚、囊胚均差异显著（P<0.05）,桑椹胚与早期囊胚之间差异不显著（P>0.05）;8-细胞、桑椹胚、早期囊胚半胚在三种培养液中的发育状况均为DMEM优于TCM-199和mPBS,TCM-199优于mPBS,除8-细胞胚胎在mPBS中的发育至囊胚的比率与TCM-199差异不显著（P>0.05）,其余差异均显著（P<0.05）。4将不同时期分割的半胚置于相同的培养液中:TCM-199培养液中8-细胞分割后的半胚发育至囊胚的比率显著低于桑椹胚、早期囊胚分割后半胚发育至囊胚的比率（分别为22.22% vs 57.38% vs 67.86%, P<0.05）;桑椹胚与早期囊胚半胚发育至囊胚的比率差异不显著;DMEM培养液中8-细胞分割后的半胚发育至囊胚的比率显著低于桑椹胚、早期囊胚分割后半胚发育至囊胚的比率（分别为58.33% vs 74.65% vs 85.29%, P<0.05）;桑椹胚与早期囊胚差异不显著（P>0.05）。5本试验比较了去除粘蛋白层对胚胎分割的影响,结果表明:桑椹胚、早期囊胚去除粘蛋白层组（+）在分割成功率上显著高于未去除粘白层组（-）（分别为93.24% vs 80.68%; 92.40% vs 80.95%）,经检验差异均显著（P<0.05）,但是半胚发育至囊胚的比率与未处理组（-）相比差异均不显著（分别为71.01% vs 74.65%; 78.82% vs 85.29%, P>0.05）。6不同分割液对未去除粘蛋白层桑椹胚、早期囊胚分割效果的影响,结果表明桑椹胚、早期囊胚在0.125M浓度的蔗糖液中分割,其分割成功率均略低于在0.25M浓度的蔗糖液中分割,但桑椹胚、早期囊胚半胚发育至囊胚的比率两者差异不显著（P>0.05）。7利用显微分割和徒手分割的方法对去除粘蛋白层的桑椹胚进行分割,徒手分割的分割成功率略低于显微分割（93.24% vs 97.62%）,经检验差异不显著（P>0.05）。发育至囊胚的比率徒手分割低于显微分割（71.01% vs 85.37%）,经检验两者差异显著（P<0.05）。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 文献综述
• 1. 兔的超数排卵
• 2. 胚胎分割
• 3. 本研究的目的及意义
• 材料与方法
• 1. 试验材料
• 1.1 试验兔的选择
• 1.2 主要试剂
• 1.3 主要仪器设备
• 1.4 冲胚液、分割液、培养液的配制
• 1.5 持卵针、分割针、徒手分割刀片的制作
• 2. 试验方法
• 2.1 超排处理
• 2.2 胚胎采集前的准备
• 2.3 胚胎的采集
• 2.4 胚胎的评定
• 2.5 胚胎粘蛋白层的去除
• 2.6 胚胎分割方法
• 2.7 半胚的体外培养
• 3. 数据分析
• 结果
• 1. 超排结果
• 1.1 不同剂量的 FSH 对超排效果的影响
• 1.2 不同促性腺激素对超排效果的影响
• 2. 胚胎分割结果
• 2.1 不同发育阶段胚胎在不同培养液中的分割效果比较
• 2.2 去除粘蛋白层对桑椹胚、早期囊胚分割效果及分割后体外发育的影响
• 2.3 不同分割液对未去除粘蛋白层桑椹胚、早期囊胚分割效果的影响
• 2.4 徒手分割与显微分割对桑椹胚分割效果的比较
• 讨论
• 1 不同促性腺激素对兔超排效果的影响
• 1.1 不同剂量 FSH 的影响
• 1.2 不同促性腺激素对超排效果影响
• 2 胚胎分割
• 2.1 不同发育阶段胚胎在不同培养液中的分割效果比较分析
• 2.2 去除粘蛋白层对桑椹胚、早期囊胚分割效果及分割后体外发育的影响分析
• 2.3 不同分割液对未去除粘蛋白层桑椹胚、早期囊胚分割效果的影响分析
• 2.4 徒手分割与显微分割对桑椹胚分割效果的比较
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间发表论文