AI429618在小鼠胚期表达的探究

论文摘要

通过对比孤雌或孤雄小鼠和普通小鼠的表达差异来寻找潜在的印记基因是发现印记基因的一种常规方法。2004年课题组在通过基因芯片筛选发现:在孤雌生殖胚胎以及正常胚胎中具有差异性表达的一组基因。而其中一个基因经测序后检索确认其编号AI429618。目前该基因仅在小鼠中发现,它位于小鼠1号染色体上,DNA全长7884 bp,而关于AI429618基因的研究目前鲜有报道。本文通过采用原位杂交和Northern-blot杂交的方法对该基因进行RNA水平的表达谱分析,从而初步探索AI429618的胚期表达模式。Northern杂交表明该基因在E12.5、E.15.5、E18.5三个时期都有所表达,并且在E12.5的小鼠胚胎中处于一个相对较高的转录水平,E15.5表达骤降并且基本上与E18.5（略高）持平。全胚胎及切片原位杂交结果表明,该基因表达信号在E9.5小鼠胚胎中表达于舌、腮弓以及尾芽,而在E10.5期信号延伸到脑部和前后肢芽,此外,在颈椎和胸椎处也有表达;而在E15.5胚胎的切片原位杂交中,这一基因的表达信号已经扩展到全身的各处（前脑、后脑、舌、心,肺、肝、小肠、肠、生殖腺、骨骼肌）,其中尤以胸腺、肺、肝、肾、小肠中的信号最显著。结果显示该基因在胚胎发育的前中期表达较高,后期下降并且广泛表达,推测该基因可能对胚胎的正常发育起着重要作用。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第1章 绪论
• 1.1 课题来源
• 1.2 课题背景
• 1.3 国内外研究现状
• 1.3.1 关于印记
• 1.3.2 核酸探针简介
• 1.3.3 针对本基因所采用的研究方法
• 1.4 实验路线
• 1.5 研究目的和意义
• 第2章 实验材料和方法
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 实验动物、菌株、载体
• 2.1.2 主要试剂和引物
• 2.1.3 主要仪器和软件
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 制备探针
• 2.2.2 原位杂交方法
• 2.2.3 Northern Blot 实验方法
• 2.3 本章小结
• 第3章 AI429618 生物信息学分析
• 3.1 引言
• 3.2 AI429618 序列信息
• 3.3 氨基酸编码蛋白信息
• 3.3.1 氨基酸物理性质
• 3.3.2 蛋白的疏水区分析
• 3.4 本章小结
• 第4章 AI429618 表达谱检测与分析
• 4.1 引言
• 4.2 AI429618 及gapdh基因探针的制备
• 4.3 Northern杂交
• 4.3.1 总RNA提取
• 4.3.2 半定量RT-PCR
• 4.3.3 Northern blot 分析
• 4.4 原位杂交实验结果
• 4.4.1 全胚胎原位杂交结果
• 4.4.2 胚胎组织切片原位杂交
• 4.5 讨论
• 4.5.1 表达谱研究
• 4.5.2 转录本分析
• 4.5.3 关于AI429618 基因的表观遗传学修饰
• 4.6 本章小结
• 结论
• 展望
• 参考文献
• 附录
• 攻读学位期间发表的学术论文
• 致谢