苯并芘对肺泡Ⅱ型上皮细胞A549氧化应激的影响

论文摘要

目的：研究不同浓度苯并芘（benzo（a）pyrene, B（a）P）对肺泡Ⅱ型上皮细胞A549氧化、抗氧化状态的影响,以及细胞抗氧化酶的变化规律,为探讨香烟烟雾中B（a）P对呼吸道上皮细胞的氧化损伤机制提供细胞毒理学的依据。方法：选用A549细胞株以模拟人肺泡Ⅱ型上皮细胞作为研究对象,采用0.1umol/L、1.0umol/L、10.0umol/LB（a）P持续处理A549细胞72小时,从蛋白水平检测MDA含量,TAC、总SOD、MnSOD、Cu/znSOD和CAT活性,再从RNA水平采用RT-PCR法验证MnSOD的表达情况。结果：A549细胞在B（a）P的处理下其MDA水平随着B（a）P的浓度升高而升高,并表现出明显的剂量效应关系；总SOD、MnSOD活性在0.1u mol/L处理组呈现明显的诱导效应,与对照组相比均有显著性差异（P<0.05）,而在1.0u mol/L、10.0u mol/L处理组总SOD、MnSOD活性与对照组相比反而下降,差异有统计学意义（P<0.05）；RNA水平测定MnSOD的表达情况,与蛋白水平检测结果一致；CAT活性随着B（a）P的浓度升高呈现逐渐增高的趋势,0.1u mol/L、1.0u mol/L、10.0u mol/L B（a）P浓度组与对照组相比分别提高了1.4、1.5和2.3倍（p<0.05）,呈剂量效应性增高。结论：B（a）P可致A549细胞的脂质过氧化水平增高,且MDA水平与B（a）P的浓度呈正比,说明B（a）P浓度越高,细胞氧化损伤越重。在B（a）P的作用下细胞抗氧化酶发生适应性变化,TAC、CAT随着B（a）P浓度的上升而上调,总SOD、MnSOD活性有先增高后降低的趋势。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 英文缩写说明
• 第一章 前言
• 第二章 材料与方法
• 2.1 材料与仪器
• 2.1.1 细胞株
• 2.1.2 主要仪器
• 2.1.3 主要试剂
• 2.2 方法
• 2.2.1 A549细胞处理及分组
• 2.2.2 总蛋白质抽提
• 2.2.3 BCA法测定蛋白质含量
• 2.2.4 RNA抽提
• 2.2.5 逆转录反应
• 2.2.6 PC
• 2.2.7 总抗氧化能力测定（FRAP）
• 2.2.8 总SOD活性及MnSOD活性测定测定
• 2.2.9 MDA测定
• 2.3 数据统计学分析
• 第三章 结果
• 3.1 B（a）P对A549细胞MDA含量的影响
• 3.2 B（a）P对A549细胞TAC活性的影响
• 3.3 B（a）P对A549细胞总SOD、MnSOD及Cu/znSOD活性的影响
• 3.4 B（a）P对A549细胞CAT活性的影响
• 3.5 B（a）P对A549细胞MnSOD基因RNA表达的影响
• 第四章 讨论
• 第五章 结论
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 致谢