神经降压素及其受体在雄激素非依赖性前列腺肿瘤的表达

论文摘要

在欧美各国前列腺癌是最常见的男性恶性肿瘤,死亡率仅次于肺癌,居第二位。我国前列腺癌发病率虽远低于西方国家,但近年来我国前列腺癌发病率呈显著增长趋势。原发性前列腺癌多为雄激素依赖性前列腺癌,约80%前列腺癌患者经过内分泌治疗后发展为雄激素非依赖性前列腺癌,雄激素非依赖性前列腺癌的发生和治疗成为前列腺癌治疗中最棘手的问题。为此,对雄激素非依赖性前列腺癌的发生机制或前列腺癌的进展机制进行研究,以获得更好的预防和治疗方法便显得十分重要,也是现阶段前列腺癌研究中的一个热点。第一部分NT及其受体在雄激素非依赖性原位前列腺癌动物模型中的表达目的：建立并论证激素非依赖性LNCaP原位前列腺癌动物模型,研究NT、NTSR1与NTSR2在原位前列腺癌动物模型的表达。方法：通过原位种植包埋法和手术去势建立雄激素非依赖性前列腺癌动物模型。应用Affymetrix表达谱芯片技术筛选差异基因。用RT-PCR和Q-PCR技术比较前列腺癌原位肿瘤组织标本中NT、NTSR1及NTSR2的基因表达,应用免疫组化和ELLSA技术比较三组前列腺癌原位肿瘤组织标本中AR、PSA、NT、NTSR1及NTSR2的蛋白质表达。结果：（1）本实验建立了LNCaP雄激素依赖性和雄激素非依赖性原位前列腺癌动物模型,经AR、睾酮、PSA、腋下肿瘤生长曲线和成瘤活性,论证这两种前列腺癌动物模型具有不同的生长特性及其雄激素依赖性成功建立了雄激素非依赖性原位前列腺癌动物模型。（2）Affymetrix表达谱芯片技术检测结果雄激素非依赖组肿瘤组织NT的表达高于雄激素依赖组肿瘤组织,差异倍数为5.10；去势3天组肿瘤组织NT的表达低于雄激素依赖组肿瘤组织,差异倍数为0.33。（3）RT-PCR结果显示：以雄激素依赖组肿瘤组织的基因表达水平为对照,雄激素非依赖组NT的基因表达水平是雄激素依赖组的1.41倍（P<0.01,差异有统计学意义）；去势3天组是雄激素依赖组的0.78倍（P<0.05,差异有统计学意义）。雄激素非依赖组NTSR1的mRNA表达水平是雄激素依赖组0.74倍（P<0.05,差异有统计学意义）；去势3天组NTSR1的mRNA表达水平是雄激素依赖组1.74倍（P<0.01,差异有统计学意义）。去势3天组NTSR2的表达水平是雄激素依赖组1.41倍（P<0.05,差异有统计学意义）。（4）Q-PCR结果显示,以雄激素依赖组肿瘤组织的基因表达水平为对照,雄激素非依赖组NT的基因表达水平是雄激素依赖组7.27倍,去势3天组是雄激素依赖组的0.46倍。去势3天组中NTSR1基因表达量是雄激素依赖组2.48倍,雄激素非依赖组NTSR1基因表达量是雄激素依赖组0.38倍；去势3天组中NTSR2基因表达量是雄激素依赖组7.26倍,雄激素非依赖组NTSR2基因表达量是雄激素依赖组0.45倍。（5）免疫组化结果显示,NT在去势3天组和雄激素非依赖组与雄激素依赖组肿瘤之间的差异均有统计学意义（P<0.01）；NTSR1在去势3天组和雄激素非依赖组与雄激素依赖组肿瘤之间的差异有统计学意义（P<0.05）; NTSR2在去势3天组和雄激素非依赖组肿瘤之间的差异有统计学意义（P<0.01）。结论：（1）成功建立了雄激素非依赖性前列腺癌原位动物模型。可以模拟临床上前列腺癌由雄激素依赖转变为雄激素非依赖过程,能够体现人前列腺癌各阶段的特点。（2）NT和NTSR1、NTSR2在雄激素非依赖性前列腺癌动物模型中过度表达,提示NT可能与前列腺癌肿瘤生长有关。（3）NTSR1和NTSR2在去势三天前列腺癌动物模型高度表达,提示NTSR1和NTSR2可能代偿性增高。第二部分NT及其受体在人体雄激素非依赖性前列腺癌组织中的表达目的：研究NT、NTSR1与NTSR2在人体雄激素非依赖性前列腺肿瘤的表达。方法：应用RT-PCR和Q-PCR技术比较人前列腺癌原位肿瘤组织标本中NT、NTSR1及NTSR2的基因表达,应用组织免疫组化技术研究前列腺癌原位肿瘤组织标本中NT、NTSR1及NTSR2的蛋白质表达。结果：（1）RT-PCR和Q-PCR结果显示,在内分泌治疗组肿瘤组织中NT基因表达出现不同程度的下调,NTSR1和NTSR2基因表达均表现出上调；在雄激素非依赖组肿瘤组织NT基因表达出现不同程度的上调,NTSR1和NTSR2基因表达均表现出下调；（2）免疫组化结果显示,NT在内分泌治疗组表达降低,雄激素非依赖组表达增高与雄激素依赖组肿瘤之间的差异均有统计学意义（P<0.01）；NTSR1在内分泌治疗组和雄激素非依赖组表达增高与雄激素依赖组肿瘤之间的差异均有统计学意义（P<0.05）；NTSR2在内分泌治疗组表达增高和雄激素非依赖组肿瘤之间的差异有统计学意义（P<0.01）。结论：（1）NT在前列腺肿瘤中持续表达,可以作为前列腺癌诊断的一种新的标志物。（2）NTSR1、NTSR2可以做为前列腺肿瘤的治疗靶点抑制肿瘤细胞的生长。（3）NT和NTSR1、NTSR2在雄激素非依赖性前列腺癌组中过度表达,提示NT可能与前列腺癌肿瘤生长有关。（4）NTSR1和NTSR2在内分泌治疗组高度表达,提示NTSR1和NTSR2可能在内分泌治疗期代偿性增高。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 符号说明
• 前言
• 研究现状、成果
• 研究目的、方法
• 一、NT在雄激素非依赖性原位前列腺癌动物模型中的表达
• 1.1 对象和方法
• 1.1.1 动物模型的建立
• 1.1.2 基因芯片
• 1.1.3 免疫组织化学
• 1.1.4 RT-PCR与Q-PCR
• 1.1.5 酶联免疫吸附试验（ELLSA方法）
• 1.1.6 统计学处理
• 1.2 结果
• 1.2.1 雄激素非依赖性前列腺肿瘤动物模型的建立
• 1.2.2 NT在雄激素非依赖性前列腺癌动物模型的表达
• 1和NTSR₂在雄激素非依赖性前列腺癌动物模型的表达'>1.2.3 NTSR₁和NTSR₂在雄激素非依赖性前列腺癌动物模型的表达
• 1.3 讨论
• 1.3.1 雄激素非依赖性动物模型的建立
• 1.3.2 NT在雄激素非依赖性动物模型的表达
• 1.3.3 本次研究的局限性
• 1.4 小结
• 二、NT在人雄激素非依赖性前列腺癌组织中的表达
• 2.1 对象和方法
• 2.1.1 研究对象
• 2.1.2 免疫组织化学
• 2.1.3 RT-PCR与Q-PCR
• 2.1.4 统计学处理
• 2.2 结果
• 2.2.1 NT在人雄激素非依赖性前列腺肿瘤的表达
• 1和NTSR₂在人雄激素非依赖性前列腺肿瘤的表达'>2.2.2 NTSR₁和NTSR₂在人雄激素非依赖性前列腺肿瘤的表达
• 2.2.3 AR在人雄激素非依赖性前列腺癌的表达
• 2.3 讨论
• 2.3.1 AR在人雄激素非依赖性前列腺癌的表达
• 2.3.2 NT在人雄激素非依赖性前列腺癌的表达
• 2.3.3 本次研究的局限性
• 2.4 小结
• 结论
• 参考文献
• 发表论文和参加科研情况说明
• 综述 神经降压素与正常组织及肿瘤组织相关性的研究
• 综述参考文献
• 致谢