毛细管电泳化学发光均相免疫分析研究

论文摘要

本论文由综述和研究报告两部分组成。综述部分简单概述了毛细管电泳激光诱导荧光均相免疫分析的原理、应用,和毛细管电泳化学发光均相免疫分析的原理、仪器结构以及应用和该技术面临的挑战和机遇。研究报告部分包括:癌胚抗原毛细管电泳—化学发光均相免疫分析、α-干扰素毛细管电泳—化学发光均相免疫分析、催乳素毛细管电泳—化学发光均相免疫分析、人绒毛膜促性腺激素毛细管电泳—化学发光均相免疫分析。毛细管电泳技术（CE）是出现在80年代早期的一种有效的分离手段。它可以用来分离样品中含量极低的复杂组分。它因具有分离时间短,仪器简单,操作成本低等特点而得到广泛的研究。目前,在大多数商品化的毛细管电泳仪上采用紫外可见光吸收检测,因为它具有应用范围广,成本低的特点。但由于毛细管径通常小于100μm,因此光路长度受到限制。激光诱导荧光检测（LIF）因具有高的灵敏度和低的检出限而逐渐受到青睐,但仪器昂贵,而且必须进行额外的工作将非荧光物质通过柱前或柱后衍生为荧光物质。电化学发光检测可以得到高的灵敏度,而且受进样量的影响比较小。但在实际样品测定中存在着电极表面被污染的问题。化学发光分析是根据化学反应产生的光辐射确定物质含量的一种痕量分析方法。化学发光分析具有高的灵敏度(检出限可达10-12-10-18mol/L),宽的线性范围（3-6个数量级）,发光背景低及仪器设备简单等特点,适用于毛细管电泳柱后微量样品的在线检测。生物活性分子,如蛋白质、激素、氨基酸等在人类健康中扮演着重要角色,灵敏检测这些物质分子对于疾病的早期诊断和预防具有重要的意义。免疫分析（immunoassay,IA）是利用抗原（antigen,Ag）和抗体（antibody,Ab）之间的特异性反应来选择性识别和测定作为抗体或抗原的待测物。高灵敏度的化学发光检测手段与高选择性的毛细管电泳结合于一体,成为一种理想的免疫分析的方法。1癌胚抗原毛细管电泳—化学发光均相免疫分析设计了一种测定人血清中癌胚抗原的毛细管电泳—化学发光检测的均相免疫分析新方法。采用四苯硼钠增强luminol-H2O2-HRP体系化学发光的原理,测定HRP标记的生物样品。研究了多种化合物对HRP催化鲁米诺—过氧化氢化学发光的增强作用,选择四苯硼钠作为增强剂,化学发光检测经毛细管电泳分离的HRP标记的癌胚抗体及免疫复合物。测定癌胚抗原的线性范围2.0～80.0μg/L（R=0.9921）,检出限为0.1μg/L。2α-干扰素毛细管电泳—化学发光均相免疫分析建立了毛细管电泳与化学发光技术联用测定了人血清中α-干扰素的含量的新方法。采用非竞争免疫法进行免疫反应,luminol-H2O2做化学发光试剂,四苯硼钠为增强剂,研究了化学发光反应缓冲溶液类型、浓度、pn、反应计量比和背景缓冲溶液类型、pH值、浓度、进样时间、电压等对测定α-干扰素效果的影响。对经毛细管分离的HRP标记的α-干扰素抗体及免疫复合物进行了测定。α-干扰素的线性范围14.5～312 pg/ml（R=0.9939）,检出限为7.25pg/ml。在所选择的条件下,此方法灵敏度高,可以用于血液样品中含量检测。3催乳素毛细管电泳—化学发光均相免疫分析应用毛细管电泳与化学发光技术研究了人血清中催乳素的非竞争均相免疫新方法。luminol-H2O2做化学发光试剂,四苯硼钠为增强剂,使用未涂层的毛细管柱（50 cm×75μm i.d.）在50 mmol/L NaOH（pH9.5）为电泳缓冲溶液,运行电压15 KV,进样时间10 s的条件下,成功分离并检测了HRP标记的催乳素抗体及免疫复合物。测定催乳素的线性范围16～1600μIU/ml（R=0.9918）,检出限为2.3μIU/ml,并成功应用于人血清的催乳素检测中,结果令人满意。4β-人绒毛膜促性腺激素毛细管电泳—化学发光均相免疫分析采用毛细管电泳与化学发光技术联用建立了测定β-人绒毛膜促性腺激素的均相免疫新方法。利用四苯硼钠增强luminol-H2O2-HRP体系化学发光原理来检测电泳分离的游离抗体及复合物。该方法快速、灵敏,电泳11分钟即可完成相关成分的分离和定量。测定β-人绒毛膜促性腺激素的线性范围0.5～20 mIU/ml（R=0.9937）,检出限为0.1m IU/ml。在此基础上测定了人血清中β-人绒毛膜促性腺激素的含量,与酶联免疫分析法对比结果一致。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一部分 综述
• 1.1 均相免疫分析的方法类型
• 1.2 毛细管电泳免疫分析概述
• 1.2.1 毛细管电泳原理
• 1.2.2 毛细管电泳类型、模式及检测系统
• 1.2.3 毛细管电泳免疫分析方式
• 1.3 毛细管电泳激光诱导荧光均相免疫分析概述
• 1.3.1 激光诱导荧光检测原理
• 1.3.2 毛细管电泳激光诱导荧光均相免疫分析的原理
• 1.3.3 毛细管电泳激光诱导荧光均相免疫分析的应用
• 1.3.4 毛细管电泳激光诱导荧光均相免疫分析的优缺点
• 1.4 毛细管电泳化学发光均相免疫分析概述
• 1.4.1 化学发光检测原理
• 1.4.2 毛细管电泳化学发光均相免疫分析的原理
• 1.4.3 毛细管电泳化学发光均相免疫分析的仪器结构
• 1.4.4 毛细管电泳化学发光分析的应用
• 1.5 毛细管电泳化学发光均相免疫分析研究展望
• 综述部分参考文献
• 第二部分 研究报告
• 2.1 癌胚抗原毛细管电泳—化学发光均相免疫分析
• 2.1.1 引言
• 2.1.2 试验部分
• 2.1.3 结果与讨论
• 2.1.4 血清中癌胚抗原均相免疫分析
• 2.2 α-干扰素毛细管电泳—化学发光均相免疫分析
• 2.2.1 引言
• 2.2.2 试验部分
• 2.2.3 结果与讨论
• 2.2.4 血清中α-IFN均相免疫分析
• 2.3 催乳素毛细管电泳—化学发光均相免疫分析
• 2.3.1 引言
• 2.3.2 试验部分
• 2.3.3 结果与讨论
• 2.3.4 血清中催乳素均相免疫分析
• 2.4 β-人绒毛膜促性腺激素的含量毛细管电泳—化学发光均相免疫分析
• 2.4.1 引言
• 2.4.2 试验部分
• 2.4.3 结果与讨论
• 2.4.4 血清中β-HCG均相免疫分析
• 总结
• 研究报告部分参考文献
• 攻读硕士学位期间科研成果
• 致谢