论文摘要
第一部分P19细胞向心肌细胞分化过程中FABP3基因的表达变化目的观察脂肪酸结合蛋白（Fat acid binding protein-3,FABP3）基因在畸胎瘤细胞P19细胞向心肌细胞诱导分化过程中表达水平的变化,探讨FABP3基因与心肌细胞分化之间的关系。方法P19细胞经1%二甲基亚砜（DMSO）诱导悬浮培养4天（d4）形成细胞聚集体,将聚集体用生长培养基粘附培养至第15天（d15）,观察细胞跳动情况;用肌钙蛋白I（cTnI）抗体行western blot,鉴定心肌细胞分化;采用RT-PCR、Western Blot技术,在细胞分化成熟的不同时段检测P19细胞中FABP3基因mRNA和蛋白的表达水平。结果DMSO悬浮诱导4天后,用生长培养基粘附培养至第8天时,P19细胞即出现自发性节律跳动的细胞团块,Western Blot检测cTnI蛋白呈阳性;P19细胞向心肌细胞分化过程中,FABP3基因mRNA表达水平随细胞分化呈现下调后再逐渐上调的表达模式,d0-d6时段该基因表达显著下调,d0、d2-4、d5-6各时段间差异显著（P＜0.05）,其后表达逐渐上调,每隔2两个时间点（d5-6、d8-10、d12-15）之间均有显著差异（P＜0.05）;FABP3蛋白也呈现随细胞分化其表达水平下调后再逐渐上调的表达模式,于诱导分化d4天最低,但统计学分析发现FABP3蛋白表达水平在d0-d4各时段间无显著差异（P＞0.05）,其后蛋白表达水平逐渐上调,d5-6与d8-12两时段间差异具有显著性（P＜0.05）。结论FABP3基因可能参与心肌细胞的分化。第二部分FABP3基因过表达对P19细胞向心肌细胞分化的影响目的观察脂肪酸结合蛋白FABP3基因过表达（overexpression）在胚胎癌细胞P19细胞向心肌细胞诱导分化过程中对细胞分化的影响,探讨FABP3基因与心肌细胞分化之间的关系。方法构建FABP3基因的绿色荧光载体及过表达载体,转染P19细胞后,以1%二甲基亚砜（DMSO）诱导分化,用荧光显微镜和激光共聚焦检测FABP3的亚细胞定位;将FABP3基因稳定转染P19细胞,用MTT法检测细胞增殖,用流式细胞仪检测细胞周期及凋亡,并采用RT-PCR技术在细胞分化成熟的不同时段检测P19细胞中心肌分化标志基因cTnT、alpha-MHC、GATA4、MEF2c的mRNA表达水平。结果FABP3定位于细胞浆和细胞核中,仅在细胞分裂时核内FABP3的表达才呈现消失现象;MTT法和流式细胞仪检测发现FABP3具有抑制P19细胞增殖、促进细胞凋亡的作用;稳定过表达FABP3基因的P19细胞在相同诱导分化条件下,其分化相关标志基因的表达量显著低于对照细胞。结论FABP3具有抑制P19细胞增殖、促进细胞凋亡的作用,可能抑制P19细胞向心肌细胞的分化。
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