奶牛乳房炎主要病原菌分离鉴定及其多联苗抗体检测研究

论文摘要

奶牛乳房炎是奶牛的常见病和多发病之一,因其病因复杂,难以防治,给奶牛养殖业带来了巨大的经济损失,还危害到人类健康。利用疫苗来预防和控制奶牛乳房炎是一种安全、经济、有效的方法。本研究对奶牛乳房炎主要病原菌进行了分离鉴定,初步建立了间接ELISA检测乳房炎多联苗抗体的方法,为客观评价疫苗效果及其深入研究提供了科学依据。采集大型奶牛养殖场的临床型和隐性乳房炎乳样89份,对其主要病原菌进行了分离鉴定及药敏试验。结果5份乳样未检出细菌,其余84份主要分离出无乳链球菌、停乳链球菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等共计137株,其中无乳链球菌52株,占37.96%;停乳链球菌20株,占14.60%;金黄色葡萄球菌29株,占21.17%;大肠杆菌22株,占16.06%;其它14株,占10.21%。链球菌、葡萄球菌和大肠杆菌占了所分离菌的89.79%,是奶牛奶牛乳房炎的主要病原菌。药敏试验结果表明:先锋霉素Ⅴ、新霉素、环丙沙星、丁胺卡那霉素对4种主要病原菌高度敏感,而青霉素G、链霉素、氨苄西林和复方新诺明低度或不敏感,产生耐药性,并且结合实际情况,探讨了奶牛乳房炎的综合防控措施,为奶牛乳房炎的防治提供参考依据。利用超声波破碎法制备无乳链球菌、停乳链球菌和金黄色葡萄球菌三可溶性抗原,根据常规的ELISA方法,通过反应体系的优化,初步建立了间接ELISA检测奶牛乳房炎多联苗抗体的方法。结果表明该方法特异性强,稳定性好,三可溶性抗原反应体系一致,确定了最佳反应条件:三抗原最适包被浓度4.0～6.0μg/mL,4℃包被作用24h;封闭液为1%BSA-PBST,37℃封闭30min;血清最适稀释度1∶200,酶标二抗工作浓度1:20 000,分别37℃作用30min;TMB底物系统显色测定。

论文目录

• 摘要
• Summary
• 第一部分 文献综述
• 第一章 奶牛乳房炎的研究现状
• 1 乳房炎的概念、分类及临床、组织变化
• 1.1 奶牛乳房炎的概念
• 1.2 奶牛乳房炎的分类及临床特征
• 1.3 常见几种奶牛乳房炎病理组织学变化
• 1.4 奶牛隐性乳房炎乳腺组织超微结构变化
• 2 奶牛乳房炎的病因及发病机理
• 3 奶牛乳房炎的诊断和检测方法
• 3.1 乳汁病原微生物检查
• 3.2 乳汁体细胞计数
• 3.3 乳汁导电性检测
• 3.4 乳汁pH 值检验
• 3.5 乳成分直接检测法
• 3.6 MTT 检测法
• 3.7 PCR 检测方法
• 3.8 其他诊断检测方法
• 4 奶牛乳房炎的综合防治
• 4.1 加强饲养管理，搞好挤奶卫生，保证饲料的营养均衡
• 4.2 定期对泌乳牛群乳房炎的发病情况进行监测
• 4.3 抗生物治疗
• 4.4 疫苗控制
• 4.5 卵黄抗体
• 4.6 中药治疗
• 4.7 其他方法
• 第二章 奶牛乳房免疫机制及其疫苗的研究进展
• 1 奶牛乳腺免疫学机制
• 1.1 物理性防御机制
• 1.2 细胞免疫机制
• 1.3 体液免疫机制
• 1.4 其他免疫成分
• 1.5 奶牛乳房炎与肥大细胞
• 2 乳房炎疫苗的研究现状
• 2.1 金黄色葡萄球菌疫苗
• 2.2 大肠杆菌疫苗
• 2.3 链球菌疫苗
• 2.4 乳房炎多联疫苗
• 2.5 疫苗免疫效力评价方法的研究
• 2.6 结语与展望
• 第二部分 实验研究
• 第三章 奶牛乳房炎主要病原菌的分离鉴定及其药敏试验研究
• 1 材料
• 1.1 乳样来源
• 1.2 仪器设备
• 1.3 培养基及试剂
• 2 方法
• 2.1 乳样的采集与处理
• 2.2 主要病原菌的分离纯化培养
• 2.3 主要病原菌纯培养物的生化鉴定
• 2.4 菌株不同保存方法的比较
• 2.5 药敏试验
• 3 结果
• 3.1 奶牛乳房炎检测结果
• 3.2 主要病原菌的分离鉴定结果
• 3.3 奶牛乳房炎感染类型
• 3.4 菌株保存方法的比较结果
• 3.5 药敏试验结果
• 4 讨论
• 第四章 间接ELISA 检测奶牛乳房炎多联苗抗体方法的研究
• 1 材料
• 1.1 奶牛乳房炎多联苗
• 1.2 培养基及试剂
• 1.3 仪器设备
• 1.4 实验动物
• 2 方法
• 2.1 可溶性抗原的制备
• 2.2 Lowry 法测定各抗原蛋白含量
• 2.3 奶牛乳房炎多联苗的免疫及血清制备
• 2.4 间接ELISA 检测乳房炎多联苗血清抗体方法的建立
• 2.5 泌乳牛免疫后血清抗体水平的检测
• 3 结果
• 3.1 可溶性抗原制备及其蛋白浓度测定
• 3.2 间接ELISA 检测乳房炎多联苗抗体方法的条件优化
• 3.3 免疫血清抗体水平检测结果
• 4 讨论
• 结论
• 致谢
• 参考文献
• 个人简介
• 导师简介