砷诱导人外周血淋巴细胞凋亡及硒拮抗作用的研究

论文摘要

目的:体外培养人外周血淋巴细胞,探讨不同浓度的亚砷酸钠（NaAsO2）对淋巴细胞的生物学效应及作用机制,并观察亚硒酸钠（Na2SeO3）对砷毒性的拮抗作用。方法:用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT法）观察不同浓度砷和砷硒联合对淋巴细胞生长的影响,并用倒置显微镜、透射电镜、荧光染色、细胞免疫组化法、琼脂糖凝胶电泳等检测方法,分别对不同浓度的加药组与对照组的淋巴细胞形态学改变,细胞的存活率及bcl-2蛋白表达进行观察和测定:并用流式细胞仪测定淋巴细胞凋亡率和细胞周期分布。结果:（1）NaAsO2和Na2SeO3在一定浓度范围内以浓度依赖方式抑制淋巴细胞生长,其IC50分别为8.63μmol/L和5.12μmol/L。淋巴细胞的生存率随着NaAsO2浓度的增加而降低;浓度为0.5μmol/L的硒对各浓度的砷有一定的拮抗作用;（2）用砷组在荧光显微镜和透射电镜下均可见明显的细胞凋亡形态特征,电镜下观察,淋巴细胞表面突起较少或脱失,部分细胞核染色质聚集、边移、线粒体结构模糊不清:（3）1.0μmol/L NaAsO2作用淋巴细胞48小时后,琼脂糖凝胶电泳可见到DNA“梯形”条带;（4）流式细胞仪分析可见0.1、1.0、5.0μmol/L用砷组有亚“G1”峰

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 材料与方法
• 1.材料
• 1.1 试剂
• 1.2 仪器
• 1.3 主要工作
• 2.方法
• 2.1 分离人外周血淋巴细胞
• 2.2 淋巴细胞的鉴定
• 2.3 淋巴细胞的体外培养
• 2.4 MTT还原实验
• 2.5 形态学观察淋巴细胞凋亡情况
• 2.6 琼脂糖凝胶电泳
• 2.7 免疫组化法检测bcl-2原癌基因的表达
• 2.8 流式细胞术检测DNA含量及周期
• 2.9 统计分析
• 结果
• 讨论
• 小结
• 致谢
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 附录