山核桃种蒲部分活性物质鉴别及核桃酮的研究

论文摘要

胡桃科植物的萘醌类、黄酮类、酚类、萜类等生物活性物，因具有抗肿瘤、抑菌、化感、杀虫等重要生理活性，而显得市场前景突出。本研究以资源丰富且遭废弃的山核桃种蒲为原料，对其活性成分进行鉴别及部分单体化合物进行了深入研究。研究结果如下：①通过定性检测，系统的研究了山核桃种蒲的化学成分。初步确定含有：有机酸、皂甙、蒽醌类、黄酮类、内酯、香豆素、强心苷、生物碱、萜类、甾类等。②研究了分离纯化氯仿提取物的主成分的条件。首先用制备型薄层层析进行了粗分离。单因素试验确定了展开剂的溶剂种类以及体积比的上下限；在此基础上，首次提出了用二次通用旋转设计来优化溶剂的体积比，取得了良好预期效果。然后用反相硅胶柱层析进行纯化，HPLC测定核桃酮为最主要峰，分段收集粗品洗脱液，合并纯度95%以上的流份，得核桃酮标准品。最后产品纯度达98.1%，可作为药物标准品用于分析测试或药理毒理研究。③结合UV、HPLC、EI-TOF-MS（70eV）、1H NMR、13C NMR对核桃酮进行了表征，为无需标准品的快速检测提供了理论参数。最大吸收波长在260nm和340nm，分子量为178，含6个双键，主要分解裂解产物的特征离子峰位于：m/z121（97%）、m/z132（20.5%）、m/z160（15%）、m/z122（37%）、m/z150（27%）、m/z149（15.6%），并推断了可能的质谱裂解途径。④研究了热回流法提取核桃酮的工艺条件。对高效液相测定核桃酮的方法学进行了考察，从而保证工艺生产上的质量控制。单因素试验确定了95%乙醇为最佳提取溶剂，提取2次为好。采用正交试验法L9（34）考察了提取温度、料液比、提取时间。结果表明：80℃下，1:10固液比，回流60min效果最好。提取工艺简单可行，稳定可行，适于核桃酮大规模提取。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• Abbreviation Keys
• 文献综述
• 1 胡桃科化学成分研究进展
• 2 胡桃科药理活性的研究进展
• 3 天然产物分离纯化研究进展
• 4 天然有机化合物结构鉴定方法
• 1 引言
• 2 材料与方法
• 2.1 供试材料
• 2.2 药品试剂
• 2.3 仪器设备
• 2.4 山核桃种蒲的化学成分定性试验
• 2.5 氯仿提取物薄层层析（TLC）的分离制备
• 2.5.1 山核桃种蒲氯仿提取物制备
• 2.5.2 薄层层析溶剂系统的初筛试验
• 2.5.3 薄层层析溶剂的单因素试验
• 2.5.4 二次通用旋转设计展开剂及最大间距（s）
• 2.5.5 薄层层析分离制备氯仿提取物
• 18柱层析纯化'>2.6 核桃酮粗制品的C₁₈柱层析纯化
• 2.7 核桃酮的检测与结构鉴定
• 2.7.1 最大吸收波长测定
• 2.7.2 高效液相色谱（HPLC）分析
• 2.7.3 飞行时间质谱（TOF-MS）分析与元素分析
• 2.7.4 核磁共振（NMR）分析
• 2.8 热回流法提取核桃酮的工艺研究
• 2.8.1 核桃酮的HPLC测定及其方法学考察
• 2.8.2 热回流法提取核桃酮的试验设计
• 3 结果与分析
• 3.1 山核桃种蒲定性检测与结果
• 3.2 氯仿提取物的薄层层析结果
• 3.2.1 展开剂的溶剂种类选择
• 3.2.2 展开剂系统的单因素试验结果
• 3.2.3 二次通用旋转设计优化展开剂系统
• 18柱层析分离结果'>3.3 核桃酮粗制品的 C₁₈柱层析分离结果
• 3.4 核桃酮的分离与结构鉴定结果分析
• 3.5 核桃酮的HPLC测定结果及方法学验证
• 3.5.1 线性关系试验结果
• 3.5.2 精密度试验结果
• 3.5.3 稳定性试验结果
• 3.5.4 重现性试验结果
• 3.5.5 加样回收率试验结果
• 3.6 热回流提取核桃酮的单因素试验结果
• 3.6.1 不同提取溶剂的影响情况
• 3.6.2 不同提取温度的影响情况
• 3.6.3 不同料液比的影响情况
• 3.6.4 不同提取时间的影响情况
• 3.6.5 不同提取次数的影响情况
• 3.7 热回流提取核桃酮的正交试验结果
• 4 讨论
• 5 结论
• 参考文献
• 致谢
• 作者简介
• 发表论文
• 附录