实时荧光定量PCR检测大肠癌腹腔微转移及其临床意义的研究

论文摘要

大肠癌为常见多发的消化道恶性肿瘤，随着生活水平的提高和饮食习惯的改变，大肠癌的人群患病率有所上升，并有年轻化趋向。大肠癌病人尽管接受了以手术为主的根治术，但临床上仍有50％的大肠癌患者死于术后的肿瘤局部复发和转移，成为手术治疗失败的主要原因。因此应用先进的分子生物学技术、建立定量荧光RT-PCR方法检测大肠癌肿瘤标志物、术后转移的早期诊断受到高度重视。本项研究应用实时荧光定量PCR技术检测大肠癌腹腔内游离癌细胞及探讨其临床意义。从2003年5月至2004年1月，收集在日本爱知癌症中心手术81例大肠癌病例，应用随机引物和寡核苷酸引物，检测大肠癌病人手术腹腔冲洗液中游离细胞的癌胚抗原（CEA）mRNA和细胞角蛋白20（CK-20）mRNA双重特异性标志物，并检测3磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH）mRNA为内参因子。并在罗氏的实时荧光定量PCR（LightCycler）上进行定量分析。样本同时进行常规细胞学检查。所有病例术后经过平均为1年的随访。研究结果表明：CEA mRNA和CK-20 mRNA的阳性率和值均与肿瘤的侵润度（T），分期以及淋巴结转移相关。在一个合理界定值上，CEA和CK-20检测的敏感度与特异度均为100％和100％，而常规的细胞学检查则为33％和100％。CEA或CK20的水平异常与大肠癌手术后无瘤生存率密切相关，通过实时荧光定量PCR方法，测定腹腔冲洗液中CEA和CK20的值，显示出高于常规细胞学检查的特异性和敏感性，是检测大肠癌腹腔微转移的有效方法。为临床治疗大肠癌分子水平的诊断、以及随后的对于具有高危因素病人的辅助化疗提供了一个新的策略。

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前言

病例和方法

1.细胞株

2.病例收集

3.标本收集

4.RT-PCR检测

4.1 cDNA合成

4.2 实时荧光定量PCR分析

5.资料分析

6.术后随访

结果和分析

1.常规细胞学检查

2.大肠癌在腹腔冲洗液中CEA水平

2.1 随机引物合成CEA cDNA的结果

2.2 寡核苷酸引物合成CEA cDNA的结果

2.3 常规细胞学检查结果和实时荧光定量PCR结果

3.大肠癌在腹腔冲洗液中CK-20水平

3.1 随机引物合成CK-20 cDNA的结果

3.2 寡核苷酸引物合成CK-20 cDNA的结果

4.初步随访结果

讨论

结论

硕士论文英文稿

参考文献

综述和论文

胃癌腹腔CEA和CK-20mRNA检测的研究进展

浙江省近9年大肠癌临床特征分析研究

历年发表论文题录

致谢

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