登革热媒介白纹伊蚊mtDNA-COI和mtDNA-ND4基因多态性研究

论文摘要

目的:研究不同地理种群白纹伊蚊（Aedes albopictus）的线粒体NADH脱氢酶亚基Ⅳ（mtDNA-ND4）和线粒体细胞色素氧化酶亚基Ⅰ（mtDNA-COI）基因序列特征,探索从分子水平对不同地理株进行鉴别,掌握不同地理种群白纹伊蚊遗传结构以及基因漂流,了解登革热媒介伊蚊遗传多态性,推测其与登革热流行的关系。评价mtDNA-ND4和mtDNA-COI作为分子标志物在白纹伊蚊种内鉴别上的应用价值。方法:采集福建省四个地区不同海拔高度、登革热流行区与非流行区的白纹伊蚊幼虫,实验室饲养至成蚊,形态鉴定并收集、制成标本,以国内其它地区（云南、上海、贵州）白纹伊蚊作为对照,参考相关文献设计的引物,研磨并提取线粒体DNA,采用PCR方法扩增mtDNA-ND4和mtDNA-COI基因,通过GenBank进行序列比对确认,运用基因分析软件与遗传分析软件进行遗传分析。结果:①获得mtDNA-ND4和mtDNA-COI基因片段,长度分别为324b和415bp,碱基A+T含量分别为73.2%和70.2%,碱基置换位点分别为17和8个,颠换率为62.5%和64.71%。mtDNA-ND4核苷酸多态性（pi）为0.012,大于mtDNA-COI（0.00277）。②基于mtDNA-ND4基因,发现福建19个个体存在5个单倍型,单倍型多态性（h）为0.442,单倍型家系网络图显示福建单倍型由两种单倍型分别进化而来。N-J法与UPGMA法构建分子系统树显示种间分类清楚,但不同地理种群分类杂乱。③基于mtDNA-COI基因,发现福建、云南、上海、贵州41个个体存在6种单倍型,其中福建16个个体存在4个单倍型,单倍型多态性为0.592,分子多样性指数显示福建高于其它地理种群。单倍型家系网络显示所有的单倍型都由一种单倍型进化而来,有三种单倍型在本次研究中未被发现。遗传距离结果显示不同地理种群出现较小程度的分化（FST=0.28136）,很可能由遗传漂变引起的,AMOVA结果显示该遗传分化主要来自种群内（占71.86%）。N-J法与UPGMA法构建分子系统树显示,云南、东山、武夷山三个地理种群分别归为一类。结论:①种群遗传多态性分析结果显示不同地理种群的白纹伊蚊出现了小程度的遗传分化,很可能由遗传漂变引起,主要由种群内变异引起。福建种群的分子多态性高于其它地理种群。②在白纹伊蚊种内鉴别上,分子标志物mtDNA-COI基因序列优于mtDNA-ND4基因序列。③福建东山白纹伊蚊幼虫密度、线粒体遗传多态性高,与登革热流行地区毗邻,存在登革热暴发的危险,应引起足够的重视。

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 材料与方法
• 1. 实验材料
• 2. 实验方法
• 2.1 白纹伊蚊DNA 模板制备方法比较
• 2.2 PCR 扩增
• 2.3 基于mtDNA-ND4 不同地理种群白纹伊蚊遗传分析方法
• 2.4 基于mtDNA-COI 不同地理种群白纹伊蚊遗传分析方法
• 结果
• 1 白纹伊蚊MTDNA 模板制备方法比较结果
• 2 白纹伊蚊MTDNA 序列比对结果
• 3 基于MTDNA-ND4 不同地理种群白纹伊蚊遗传分化分析结果
• 4 基于MTDNA-COI 不同地理种群白纹伊蚊遗传分化分析结果
• 讨论
• 1. 蚊虫MTDNA 提取方法分析
• 2. 白纹伊蚊线粒体基因遗传多态性
• 3. 白纹伊蚊线粒体基因遗传多态形成的影响因素
• 4. 登革热媒介遗传多态性与其传播登革热病毒媒介效能的关系
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 综述