论文摘要
1.背景与目的:表皮生长因子受体(EGFR)在很多人类肿瘤中都存在着过表达,已被当作一个治疗靶点进行了广泛的研究,但是否是肿瘤、尤其是胶质瘤发生的病因分子研究报告尚少。肿瘤血管形成以及抗肿瘤血管治疗是肿瘤学研究领域中的热点,近耒研究表明肿瘤血管管壁除了传统认为的由血管内皮细胞构成之外,尚有肿瘤细胞本身直接参与构成肿瘤血管(拟态血管生成)和肿瘤细胞与血管内皮细胞共同参与构成肿瘤血管(马赛克血管)之可能,但在包括胶质瘤在内的大多数肿瘤中尚难以肯定后二者的存在,只是在视网膜恶性黑色素瘤中较多见。本实验旨在探讨EGFR基因在针对胶质瘤发生、发展相关组织芯片中的表达及意义,并运用CD34—PAS双染观察人脑胶质瘤裸小鼠皮下和颅内移植瘤中的血管生成模式,同时探讨干细胞标志物ABCG2在移植瘤中的表达。2.方法:针对上述目的分别构建了两张不同的组织芯片。第一张组织芯片中包含有不同恶性程度的人脑胶质瘤临床标本、裸小鼠移植瘤标本、体外细胞系球体、脑肿瘤干细胞球体和相应的对照标本共118例标本,对其行EGFR的SABC法免疫组化染色,分析其表达率及表达强度。同时运用荧光实时定量PCR技术检测芯片中包含的几个细胞系EGFR mRNA的表达含量,以对芯片中蛋白水平的研究进一步验证。第二张组织芯片包含有建立的人脑胶质瘤裸小鼠皮下移植瘤模型30例、颅内移植瘤模型20例及对照组标本共58例标本,对其行HE染色和免疫组织化学染色,光镜下观察两种移植瘤中的血管生成模式及ABCG2的表达率和表达部位。3.结果:第一张组织芯片中观察到EGFR染色主要位于细胞胞膜。在71例人脑胶质瘤组织中,EGFR阳性表达率为46.5%,各级别人脑胶质瘤组织中EGFR阳性表达率分别为Ⅰ级11.1%,Ⅱ级28.0%,III级60.9%,Ⅳ级78.6%;Ⅰ级、II级与III级、IV级阳性率比较,两者差异显著(X2=13.813,P<0.001);并且EGFR的阳性表达率与病理级别呈直线正相关(r=0.991,P=0.009)。在正常人脑组织、正常裸小鼠骨髓及神经干细胞球体中EGFR均呈阴性表达;在裸小鼠皮下移植瘤、人脑胶质瘤体外细胞系球体及脑肿瘤干细胞球体中EGFR均呈阳性表达。荧光实时定量PCR检测显示EGFR mRNA在人脑胶质瘤体外细胞系球体及脑肿瘤干细胞球体中表达含量高,在神经干细胞球体中表达含量极低,与芯片中蛋白水平的检测相一致。第二张组织芯片中观察到血管内皮细胞被覆的血管在人脑胶质瘤裸小鼠皮下和颅内移植瘤模型中最为常见;马赛克血管见于5/30皮下移植瘤和6/20颅内移植瘤;拟态血管见于18/30皮下移植瘤和13/20颅内移植瘤;作为对照的人正常脑组织中只见到内皮细胞被覆的血管,未见到马赛克血管和拟态血管。在两种移植瘤中局域性的肿瘤细胞呈现GFAP表达缺失。ABCG2在两种移植瘤组织中均有表达,平均阳性细胞占有率约为4%,且其表达部位与移植瘤的血管分布相吻合。4.结论:EGFR在正常组织和神经干细胞中未见表达,而在肿瘤中特别是脑肿瘤干细胞中高表达,并且是随着肿瘤恶性程度的增高而表达量增加,因此可作为胶质瘤发生发展的分子病因作进一步研究;内皮细胞被覆的血管、马赛克血管和拟态血管三种不同的肿瘤血管生成模式,在恶性程度较高的人脑胶质瘤裸小鼠皮下和颅内移植瘤组织中均存在,干细胞标志物ABCG2的表达有明显亲血管分布趋向。
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标签：胶质瘤论文; 组织芯片论文; 脑肿瘤干细胞论文; 神经干细胞论文; 移植瘤论文; 免疫组化论文; 马赛克血管论文; 拟态血管生成论文;