导读:本文包含了毕赤酵母菌论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:轮状病毒(RV),糖蛋白,毕赤酵母菌,动物免疫
毕赤酵母菌论文文献综述
王红涛,肖智[1]（2019）在《轮状病毒VP7糖蛋白基因的克隆及在毕赤酵母菌中的表达及免疫原性的分析》一文中研究指出轮状病毒(Rotavirus,RV)是一种双链核糖核酸病毒,属于呼肠孤病毒科,流行病学调查显示,轮状病毒是秋冬季引起婴幼儿感染性腹泻的重要致病因子,全世界每年有大约一亿人感染该病毒。目前,研制安全有效的疫苗是控制轮状病毒感染的重要手段之一。本研究通过基因克隆和重组技术检测20份患儿的粪便标本,提取病毒RNA,再逆转录为cDNA,根据GenBank中发表的VP7全序列设计引物,应用RT-PCR技术,从分离的轮状病毒中扩增出来960bp特异性目的片段,并构建融合表达载体pPICZαA-VP7,转入GS115毕赤酵母中。经1%甲醇诱导,镍柱亲和层析蛋白纯化,获得浓度为0.65mg/mL单一目的蛋白,经SDS-PAGE和Western Blot分析VP7蛋白的表达。结果显示克隆的VP7基因与预计的糖蛋白基因大小一致,构建的重组表达载体在GS115毕赤酵母中表达出分子质量约34kD重组糖蛋白,说明成功克隆和表达了轮状病毒的糖蛋白基因。经小鼠免疫实验结果表明,VP7蛋白加强免疫2周后,肌注组(IM)和滴鼻组(IN)小鼠IgG抗体几何平均滴度分别达到492和676,滴鼻组SIgA平均几何滴度达到43.5,可产生高水平的IFN-γ,表明VP7蛋白免疫可以有效地诱导机体产生细胞免疫,具有进一步开发研究的价值。(本文来源于《病毒学报》期刊2019年05期）
国微,杨新朝,闫尧,姜锐[2]（2018）在《毕赤酵母菌bFGF转化株的筛选及鉴定》一文中研究指出目的:鉴定毕赤酵母菌b FGF转化株并筛选出表达量较高的菌株,为后续大规模发酵提供菌种。方法:对-80℃下保存的毕赤酵母菌b FGF转化株9D和X两个菌株,挑取单克隆在MD和MM平板上进行Mut+Muts表型筛选,确定其表型;挑取单克隆:9d1~9d6、x1~x5进行YPD培养后测序,结果在NCBI上与b FGF基因进行比对。选取有b FGF基因表达的单克隆进行发酵,筛选出表达量较高的菌株。结果:从编号9d、x的毕赤酵母重组菌中挑取的99个单克隆均为Mut+型。测序结果显示:9d1、9d2、9d3、9d6、x2、x3、x4、x5均有b FGF基因表达,且9d3的bFGF表达量最高,为13.14 ng/L。(本文来源于《生物化工》期刊2018年06期）
李炎,陈捷,蒋佳兴,王叔桥[3]（2018）在《实时荧光定量PCR法检测门冬氨酸鸟氨酸原料药中毕赤酵母菌DNA残留量》一文中研究指出目的建立可定量检测门冬氨酸鸟氨酸原料药中毕赤酵母菌DNA残留量的实时荧光定量PCR方法。方法采用宿主细胞残留DNA样本前处理试剂盒(磁珠法)提取毕赤酵母菌DNA,利用毕赤酵母残留DNA检测试剂盒(PCR-荧光探针法)进行扩增反应,绘制标准曲线,建立毕赤酵母菌DNA残留量的Real-time PCR检测方法,并验证其准确性和精密性。结果毕赤酵母菌DNA质量浓度在0.03~300 pg·μL-(16)内线性良好(r>0.99),定量限为0.03 pg·μL-(16);应用该法对3批门冬氨酸鸟氨酸原料药进行测定,毕赤酵母菌DNA残留量均远低于每剂10 ng。结论该方法可用于门冬氨酸鸟氨酸原料药中毕赤酵母菌DNA残留量的定量测定。(本文来源于《中国现代应用药学》期刊2018年08期）
霍倩倩[4]（2018）在《毕赤酵母菌表达人溶菌酶对肉仔鸡生产性能、肠道微生物及免疫功能的影响》一文中研究指出本次试验主要通过饲养试验评价不同剂量毕赤酵母菌表达人溶菌酶与抗生素比对AA肉仔鸡生产性能、肠道微生物菌群、血清生化指标及免疫功能的影响,为毕赤酵母菌表达人溶菌酶替代抗生素在肉仔鸡饲粮中的适宜添加量提供试验依据。选取720只1日龄健康且体重相近的AA肉仔鸡为试验对象,将其随机分为6个处理组,每组设6个重复,每个重复20只,公母混养。空白对照组饲喂玉米-豆粕型基础日粮,抗生素组在基础日粮上添加72mg/kg盐霉素+4mg/kg黄霉素,试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组分别在基础日粮上添加2.0、4.0、6.0、8.0 g/kg毕赤酵母菌表达人溶菌酶(4702U/g),试验周期为42天。在饲养试验第35天,从每重复随机挑出公母各1只试验鸡进行为期4天的全收粪代谢试验。试验一:本试验主要考察饲粮中添加不同剂量毕赤酵母菌表达人溶菌酶与抗生素对肉仔鸡生长性能与屠宰率的影响。试验结果显示:1)在1~21 d,试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组及抗生素组的ADG、ADFI、F/G、21d体重和死亡率与对照组相比均无显着差异(P>0.05)。22-42d,在ADG和42d体重方面,试验Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组显着高于对照组(P<0.05),试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组与抗生素组无显着差异(P>0.05);在F/G方面,抗生素组、试验Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组与对照组比显着降低料重比(P<0.05)。1~42d,在ADG方面,试验Ⅱ、Ⅳ组显着高于对照组(P<0.05);在F/G方面,试验Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组及抗生素组显着低于对照组(P<0.05);在整个试验周期中ADFI和死亡率方面各处理组间均无显着差异。2)对照组、抗生素组、毕赤酵母菌表达人溶菌酶不同剂量组间在肉仔鸡的屠宰率、腿肌率等方面均无显着差异(P>0.05)。抗生素组、毕赤酵母菌表达人溶菌酶不同剂量组半净膛率显着高于对照组(P<0.05)。试验Ⅳ组全净膛显着高于对照组、抗生素组及其他试验不同剂量组(P<0.05),试验Ⅲ组胸肌率显着高于对照组与试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ组(P<0.05)。由此可见,毕赤酵母菌表达人溶菌酶能提高肉仔鸡日增重并降低料重比,提高屠体品质,达到促进生长的效果,与抗生素组效果较为一致,证明其可以直接添加于饲料中替代抗生素,以添加4.0g/kg毕赤酵母菌表达人溶菌酶对肉仔鸡的促生长效应最好。试验二:本试验主要探讨毕赤酵母菌表达人溶菌酶与抗生素比对肉仔鸡养分消化率及肠道微生物菌群的影响。试验结果显示:1)使用抗生素或不同添加剂量的毕赤酵母菌表达人溶菌酶后,肉仔鸡对CP、EE、Ca、TP的消化率较对照组比无显着差异性(P>0.05);2)试验Ⅱ、Ⅲ组与对照组比显着(P<0.05)降低空肠、盲肠中大肠杆菌及盲肠梭菌的数量;毕赤酵母菌表达人溶菌酶不同剂量组均能显着降低空肠梭菌数量(P<0.05),与抗生素组比无显着差异(P>0.05);本试验发现不同剂量毕赤酵母菌表达人溶菌酶对肉仔鸡空肠、盲肠中乳酸杆菌和双歧杆菌数量无显着影响(P>0.05)。由此可见,饲料中添加适量的毕赤酵母菌表达人溶菌酶能够提高肉仔鸡对饲粮养分的消化率,明显减少肠道内大肠杆菌和梭菌等有害微生物数量,对肠道内乳酸杆菌和双歧杆菌等有益菌没有影响,当添加量为4.0 g/kg、6.0 g/kg时其作用效果优于其他添加剂量组。试验叁:本试验主要探讨毕赤酵母菌表达人溶菌酶较抗生素对肉仔鸡血清生化指标及免疫功能的影响。试验结果显示:1)抗生素组与不同剂量人溶菌酶试验组对肉仔鸡免疫器官指数无显着(P>0.05)影响。抗生素、人溶菌酶试验各组与对照组比有提高肉仔鸡胸腺指数的趋势(P=0.066),其中试验Ⅲ组对肉仔鸡胸腺指数提高效果最好,其次是试验Ⅱ组、试验Ⅳ组、抗生素组,分别提高5.84%、4.38%、4.38%、2.95%。此外,抗生素组和人溶菌酶各处理组与对照组比有提高42日龄肉仔鸡法氏囊指数的趋势(P=0.073),其中试验Ⅱ组、试验Ⅲ效果最好,其次是抗生素组、试验Ⅰ组、试验Ⅳ组,分别提高17.39%、17.39%、14.49%、7.25%、7.25%。2)人溶菌酶各处理组与对照组比显着提高肉仔鸡血清溶菌酶含量(P<0.05),其中试验Ⅲ组效果最好,与对照组比,提高了12.91%。3)各处理组WBC数量、RBC数量、PLT数量均无显着差异(P>0.05),表明添加毕赤酵母菌表达人溶菌酶在一定程度上能够维持机体健康水平。4)抗生素组和试验Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组与对照组比显着降低了血清中ALT的含量(P<0.05),抗生素组较人溶菌酶不同剂量组血清ALT含量无显着差异(P>0.05),抗生素组、试验Ⅱ、Ⅲ组与对照组比显着降低肉仔鸡血清中AST含量(P<0.05),试验Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组与抗生素组比肉仔鸡血清AST均无显着差异(P>0.05)。抗生素组、试验Ⅱ、Ⅲ组肉仔鸡血清中GLU含量显着低于对照组和试验Ⅳ(P<0.05),试验Ⅱ、Ⅲ组较抗生素组血清GLU无显着差异(P>0.05);胆固醇是血清中主要脂质,其在血清中的含量影响机体健康,与对照组相比,抗生素组、人溶菌酶各处理组均能降低血清中CHOL含量,说明毕赤酵母菌表达人溶菌酶能够调节胆固醇代谢。由此可见,饲粮中添加毕赤酵母菌表达人溶菌酶在一定程度上能够促进免疫器官发育,提高血清中非特异性免疫指标血清溶菌酶的含量,改善肉仔鸡肝功能,促进GLU的转化和利用率,调节胆固醇代谢,从而增强机体的免疫功能与代谢功能,有利于动物增重,可以完全替代抗生素在肉仔鸡饲粮中使用,其中添加4g/kg、6g/kg毕赤酵母菌表达人溶菌酶的效果最适宜。(本文来源于《河南农业大学》期刊2018-06-01）
饶菁菁,景一娴,邹明月,胡小蕾,廖飞[5]（2017）在《季也蒙毕赤酵母菌尿酸酶基因的克隆、重组表达及表征》一文中研究指出目的:克隆一种季也蒙毕赤酵母菌的尿酸酶蛋白编码基因,并通过重组表达和表征进行确认。方法:测定酵母细胞株C.G.M.C.C 2.1008的rRNA序列鉴定其所属种,串联质谱分析此天然尿酸酶肽段序列搜索同源蛋白,测定转录组验证其诱导表达属性,据季也蒙毕赤酵母ATCC6260基因组信息推断所得尿酸酶(Uniprot id:A5DFP1)的编码序列设计引物,从C.G.M.C.C 2.1008细胞株cDNA中PCR扩增尿酸酶基因,测序后再克隆至定向表达载体pDE1及pDE2中构建带6His标签的重组表达质粒pDE1-MGU和pDE2-MGU,同时构建无6His标签的表达质粒RMGU。在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达此真菌尿酸酶,SDS-PAGE和MALDI-TOF-MS测定肽段分子质量,以尿酸为底物测定其动力学参数及抑制剂敏感性等性质,并与天然尿酸酶进行比较。结果:rRNA序列表明此菌株为季也蒙毕赤酵母,串联质谱分析胰蛋白酶解肽段表明此天然真菌尿酸酶与尿酸酶A5DFP1高度相似,转录组测序支持此尿酸酶基因高效诱导表达。用所设计引物经PCR从cDNA快速获得编码序列,T载体测序显示其与A5DFP1编码序列仅在第435位碱基不同但氨基酸仍相同。SDS-PAGE发现重组R-MGU肽段约35k Da;MALDI-TOF-MS发现其肽段约17.43k Da且与天然酶一致,但按氨基酸序列计算分子质量仅为33.98k Da,表明其可能存在化学修饰。重组表达带6His标签尿酸酶纯化后比活性接近6.0U/mg;R-MGU米氏常数、代表抑制剂的抑制常数及分子质量与天然尿酸酶无差别,但R-MGU很难纯化,使其相同条件下的热稳定性比纯化天然酶略差。结论:成功克隆了一种季也蒙毕赤酵母菌的尿酸酶,并实现其活性形式的重组表达。(本文来源于《中国生物工程杂志》期刊2017年11期）
熊进,黄魁英,夏枫耿,陈舒洁,胡海艳[6]（2017）在《耐高温β-甘露聚糖酶毕赤酵母菌M27-8发酵条件优化》一文中研究指出为获得产β-甘露聚糖酶发酵最佳条件,本研究以克隆筛选获得的产耐高温β-甘露聚糖酶的毕赤酵母菌M27-8菌株为研究对象,对不同氮源含量、葡萄糖含量、p H、发酵时间、接种量、温度和转速进行优化。结果表明:最佳产酶条件为6%玉米浆、3%葡萄糖、p H 5.5、发酵60 h、2%接种量、28℃、225 r/min,最大酶活达到452.7 U/m L,是优化前酶活138 U/m L的3.3倍。综上,此发酵培养基可用较廉价的玉米浆取代YPD培养基,从而节省成本,为工业生产奠定基础。(本文来源于《中国饲料》期刊2017年19期）
马春霞,彭金霞,何苹萍,雷爱莹,马宁[7]（2017）在《凡纳滨对虾抗菌肽crunstinA在毕赤酵母菌中的表达》一文中研究指出【目的】明确凡纳滨对虾抗菌肽crunstin A(Lvcrustin A)在毕赤酵母菌中的表达情况,为研发出一种基于重组蛋白crustin A的新型水产药物打下基础。【方法】采用全基因合成法(PAS)合成Lvcrustin A基因,然后将Lvcrustin A基因克隆至真核表达载体p YE-GAPα,所得重组质粒转化感受态细菌TOP10,以质粒提取试验盒提取的重组质粒p YE-GAPα-Lvcrustin A电转至毕赤酵母菌GS115;以SDS-PAGE电泳检测和Western blotting鉴定分析融合蛋白Lvcrustin A的表达情况,并通过保护试验验证融合蛋白Lvcrustin A对副溶血弧菌的抵抗作用。【结果】以构建的重组质粒p YE-GAPα-Lvcrustin A电转毕赤酵母菌GS115,获得的重组菌株在30℃下摇床(220 r/min)培养24 h即可获得融合蛋白Lvcrustin A,且随培养时间的延长,其表达量逐渐增多。Western blotting鉴定结果显示,纯化的融合蛋白Lvcrustin A能被抗His抗体识别。保护试验结果表明,融合蛋白Lvcrustin A对副溶血弧菌具有良好的抵抗力。【结论】利用表达质粒p YE-GAPα和酵母菌GS115可成功重组表达获得Lvcrustin A,且获得的Lvcrustin A具有促进凡纳滨对虾抵抗副溶血弧菌感染的作用。(本文来源于《南方农业学报》期刊2017年07期）
施文,马瑞,周建业,陈莉娅,马媛媛[8]（2017）在《Apidaecin型抗菌肽在毕赤酵母菌中的基因工程表达》一文中研究指出目的;利用基因工程的方法,在毕赤酵母菌(Pichia patoris,P.pastoris)中成功表达Apidaecin型抗菌肽。方法:利用PCR技术在Apidaecin基因N端插入EcoR I酶切位点、GST标签(并连接DDDDK肠激酶位点),且在C端插入终止密码子和Not I酶切位点,后将上述片段扩增后与表达载体pPICZαA连接,构建重组表达载体pPICZαA-GST-Apidaecin,并测序鉴定;将pPICZαA-GST-Apidaecin重组质粒电转至P.pastoris X33中并进行发酵表达;表达产物经GST亲和层析纯化后进行SDS-PAGE凝胶电泳鉴定,EK肠激酶切除GST标签后进行抑菌实验。结果:SDS-PAGE凝胶电泳结果显示GST-Apidaecin融合蛋白表达的产物条带位于分子量约为28KD处,与理论分子量一致;抑菌实验表明,用EK肠激酶切除GST融合标签后,Apidaecin型抗菌肽对大肠杆菌有明显的抑菌活性。结论:Apidaecin型抗菌肽在P.pastoris菌中得到成功表达并具有抑菌活性。(本文来源于《口腔医学研究》期刊2017年05期）
白梦洋,吴祖芳,李若云,翁佩芳,张鑫[9]（2017）在《混合培养条件下酿酒酵母菌与毕赤酵母菌的相互影响》一文中研究指出为研究酵母菌混合培养条件下生长状态的变化规律以及相互影响的因素,选取2种酵母菌,酿酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae,Sc)131和毕赤酵母菌(Pichia fabianii,Pf)65,考察了初始糖含量、pH值、乙醇体积分数对两菌种混合培养时生长状态的影响,并通过气相色谱-质谱分析方法考察了2种细胞脂肪酸组成的差异性。结果表明,相对于纯培养,混合培养条件下,Pf对Sc产生明显的抑制作用,在低糖和低pH值环境条件下,Sc受抑制作用加剧,当初始糖含量2%时,Pf/Sc(菌体浓度比)为28,pH 3.5时,Pf/Sc达37;在外源添加乙醇时,随着乙醇体积分数的升高,Pf受抑制程度较Sc严重,Sc生长处于相对优势地位,说明Sc较Pf耐乙醇,当乙醇体积分数为12%时,Pf/Sc为0.5。经细胞脂肪酸组成分析,Sc主要为C_(16)的棕榈酸和棕榈油酸,Pf主要为C_(18)的油酸、亚油酸和亚麻酸,混合培养时细胞脂肪酸组成主要为C_(18)型脂肪酸,Pf细胞代谢产生的亚油酸和亚麻酸的积累释放可能是抑制Sc生长的因素之一。实验结果可为进一步从转录组水平研究混合酵母相互影响的机制,以及发酵质量控制提供理论支持。(本文来源于《食品科学》期刊2017年12期）
陈骞,万小平,肖永乐,唐健雪,赵世纪[10]（2016）在《猪融合抗菌肽基因双质粒共转化重组毕赤酵母菌的构建》一文中研究指出为构建高效表达的猪融合抗菌肽蛋白的重组酵母菌发酵表达体系,规模化生产制备新型免疫分子防控动物传染病,本试验从实验室先前构建的p GAPZαA-P质粒中克隆出已构建好的猪融合抗菌肽CAMPs基因片段。通过I nfusion技术,将C AMPs片段分别克隆入p PIC9K和p PICZαA真核表达质粒中,并通过P CR以及测序验证,成功构建了p PIC9K-CAMPs和p PICZαA-CAMPs重组质粒。通过电转化将线性化p PIC9K-CAMPs转入毕赤酵母G S115基因组中,并筛选高拷贝菌株G S-PK-CAMPs。再将线性化p PICZαA-CAMPs转入重组酵母G S-PK-CAMPs中,筛选出高拷贝菌株G S-PKZ-CAMPs。对重组酵母GS-PKZ-CAMPs进行诱导表达后作转录表达研究,检测抗菌肽是否表达。最终结果显示,成功获得了G S-PKZ-CAMPs可诱导表达菌株,这给猪融合抗菌肽蛋白的大规模发酵制备和应用于动物传染病的防治奠定了可靠的初步基础。(本文来源于《四川畜牧兽医》期刊2016年12期）
毕赤酵母菌论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:鉴定毕赤酵母菌b FGF转化株并筛选出表达量较高的菌株,为后续大规模发酵提供菌种。方法:对-80℃下保存的毕赤酵母菌b FGF转化株9D和X两个菌株,挑取单克隆在MD和MM平板上进行Mut+Muts表型筛选,确定其表型;挑取单克隆:9d1~9d6、x1~x5进行YPD培养后测序,结果在NCBI上与b FGF基因进行比对。选取有b FGF基因表达的单克隆进行发酵,筛选出表达量较高的菌株。结果:从编号9d、x的毕赤酵母重组菌中挑取的99个单克隆均为Mut+型。测序结果显示:9d1、9d2、9d3、9d6、x2、x3、x4、x5均有b FGF基因表达,且9d3的bFGF表达量最高,为13.14 ng/L。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
毕赤酵母菌论文参考文献
[1].王红涛,肖智.轮状病毒VP7糖蛋白基因的克隆及在毕赤酵母菌中的表达及免疫原性的分析[J].病毒学报.2019
[2].国微,杨新朝,闫尧,姜锐.毕赤酵母菌bFGF转化株的筛选及鉴定[J].生物化工.2018
[3].李炎,陈捷,蒋佳兴,王叔桥.实时荧光定量PCR法检测门冬氨酸鸟氨酸原料药中毕赤酵母菌DNA残留量[J].中国现代应用药学.2018
[4].霍倩倩.毕赤酵母菌表达人溶菌酶对肉仔鸡生产性能、肠道微生物及免疫功能的影响[D].河南农业大学.2018
[5].饶菁菁,景一娴,邹明月,胡小蕾,廖飞.季也蒙毕赤酵母菌尿酸酶基因的克隆、重组表达及表征[J].中国生物工程杂志.2017
[6].熊进,黄魁英,夏枫耿,陈舒洁,胡海艳.耐高温β-甘露聚糖酶毕赤酵母菌M27-8发酵条件优化[J].中国饲料.2017
[7].马春霞,彭金霞,何苹萍,雷爱莹,马宁.凡纳滨对虾抗菌肽crunstinA在毕赤酵母菌中的表达[J].南方农业学报.2017
[8].施文,马瑞,周建业,陈莉娅,马媛媛.Apidaecin型抗菌肽在毕赤酵母菌中的基因工程表达[J].口腔医学研究.2017
[9].白梦洋,吴祖芳,李若云,翁佩芳,张鑫.混合培养条件下酿酒酵母菌与毕赤酵母菌的相互影响[J].食品科学.2017
[10].陈骞,万小平,肖永乐,唐健雪,赵世纪.猪融合抗菌肽基因双质粒共转化重组毕赤酵母菌的构建[J].四川畜牧兽医.2016