蟛蜞菊化学成分及抗肿瘤活性研究

论文摘要

蟛蜞菊（Wedelia chinensis）,异名马兰草、蟛蜞花、路边菊,是菊科蟛蜞菊属植物蟛蜞菊的全草。主要分布于中国南部的福建、广东、广西等省[1]。蟛蜞菊性甘、微酸、凉,具有清热解毒、化痰止咳、凉血平肝、祛瘀消肿等功效[2],主要用于治疗白喉、百日咳、痢疾、痔疮、跌打损伤。南方各省民间常用于治疗咽喉炎、喉痹、喉蛾等,还可用于预防麻疹。现临床上用于治疗肝炎、口腔炎等,效果较好[3]。但目前对该植物化学成份的研究还并不深入,研究表明已从中分离出了有机酸类、倍半萜类、三萜类、三萜苷类、黄酮类和甾类等化合物[4]。文献还报道蟛蜞菊化学成份具有广泛的药理作用,如保肝作用、解热镇痛作用和抗炎作用,但报道的多为提部位的药理活性,而其作用的物质基础尚未明确。目的:本研究旨在以蟛蜞菊（地上部分）为研究对象,运用硅胶柱色谱、聚酰胺柱色谱、葡聚糖凝胶色谱、制备薄层色谱、高效液相制备色谱以及重结晶等分离纯化技术对其地上部分的提取物进行系统研究,从中分离得到单体化合物,并应用UV、IR、MS、1H-NMR、13C-NMR、1H-1H COSY、HMQC、HMBC、NOESY等现代化手段完成单体化合物分子的平面结构和立体结构的鉴定,再对分离得到的单体化合物进行初步的抗肿瘤活性实验,以期寻找到其活性成分或活性部位,以开辟中药资源,丰富中药的多样性和完善用药的合理性。方法:干燥的蟛蜞菊属植物蟛蜞菊地上部分（3.0 Kg）适当粉碎后,用95%乙醇连续回流提取3-4次,趁热活性炭脱色、过滤,合并滤液减压浓缩至粘膏状（600 g）,即得到蟛蜞菊地上部分的提取物;将其溶于盐水中（约相当于1 g/mL的水溶液,低温水浴加热助溶）,形成悬浊液,依次用石油醚、二氯甲烷、水饱和的醋酸乙酯萃取,继而得到石油醚部位（24.5 g）、二氯甲烷部位（15.0 g）和醋酸乙酯部位（13.0 g）。本研究先后对石油醚部位、二氯甲烷部位和醋酸乙酯部位采用硅胶柱色谱进行初步分离,析出的固体和洗脱液浓缩母液,经薄层色谱检识后（薄层色谱检识板:由GF254薄层色谱硅胶与0.5% CMC-Na混匀后铺制于玻璃板上,自然晾干而成。样品点样于该类薄板上,晾干,适当展开剂展开,挥尽展开剂后先在254 nm紫外灯下观察是否有荧光,再浸入10%的硫酸-乙醇液中,取出后经140℃加热显色）,进一步用硅胶柱色谱、聚酰胺柱色谱、葡聚糖凝胶色谱、制备薄层色谱、高效液相制备色谱反复分离纯化得到单体化合物。并运用化学方法和多种波谱技术（UV, 1H-NMR, 13C-NMR, 1H-1H-COSY, HMQC, HMBC等）对这些单体化合物进行检测,依据测定的图谱数据分析确定单体化合物的平面结构和立体结构。再对得到的单体化合物进行抗肿瘤活性的初步研究。将HeLa等肿瘤细胞株悬液接种于96孔培养板,分别加入不同浓度单体化合物,培养箱中培养2天,于培养结束前4小时,各培养孔加入5 mg/ml四氮唑盐（MTT） 10μl,培养结束后,用酶联免疫检测仪检测各孔吸光度（OD）值,测定波长λ= 570 nm,参考波长λ= 630 nm,并计算肿瘤细胞生存率。结果:对蟛蜞菊属植物蟛蜞菊地上部分的化学成分进行了系统研究,具体采用了硅胶柱色谱、聚酰胺柱色谱、葡聚糖凝胶色谱、制备薄层色谱、高效液相色谱等多种分离手段或方法,从中得到13个单体化合物,并运用UV、1H-NMR、13C-NMR、1H-1H COSY、HMQC、HMBC等现代化手段对其进行结构鉴定,已确定了4个化合物的结构,该4个化合物的结构名称分别为:化合物D为24-甲叉基-9,19-环木菠萝烷醇;化合物F为β-谷甾醇;化合物H为齐墩果酸;化合物K为齐墩果酸-11,13（18）-二烯-3-O-b-D-葡萄糖醛酸甲酯。其它9个化合物的结构还在鉴定中,它们分别是:化合物A, B, C, E, G, I, J, L, M。对其中6个化合物（compound A, D, H, I, J, M）进行了抗肿瘤活性筛选,结果显示:化合物A、I和M对妇科肿瘤细胞,尤其对人子宫内膜癌细胞增殖有较强的抑制活性;化合物A和M对人脑神经胶质瘤细胞显示强的抑制活性;化合物H对人子宫颈癌细胞、人卵巢囊腺癌细胞和人黑色素瘤细胞的增殖有较好的抑制活性。结论:通过系统提取分离植物蟛蜞菊（Wedelia chinensis）地上部分,共分离得到13个化合物,并且运用了多种现代波谱手段及其相关知识对该13个化合物进行了结构鉴定,已确定了4个化合物的结构,其它9个化合物的结构还在鉴定中,其中24-甲叉基-9,19-环木菠萝烷醇（化合物D）和齐墩果酸（化合物H）为首次从该属植物中分离得到。对其中6个化合物进行了活性筛选发现有4个化合物具有显著抗肿瘤活性,其中化合物A、I和M对人的妇科肿瘤细胞,尤其对人子宫内膜癌细胞增殖有较强的抑制活性;化合物A和M对人脑神经胶质瘤细胞显示强的抑制活性;化合物H对人子宫颈癌细胞、人卵巢囊腺癌细胞和人黑色素瘤细胞的增殖有较好的抑制活性。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 研究论文 蟛蜞菊化学成分及抗肿瘤活性研究
• 引言
• 第一部分 蟛蜞菊化学成份研究
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 附图
• 附表
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 第二部分 蟛蜞菊抗肿瘤活性研究
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 附图
• 附表
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述一 Chemical Constituents in the Genus Wedelia and their Bioactivity
• 综述二 Structures and Biological Properties of the Chemical Constituents from the Genus Ligularia
• 致谢
• 个人简历