鹅FSHβ基因部分序列克隆及外显子3 SNPs与产蛋性能相关性研究

鹅FSHβ基因部分序列克隆及外显子3 SNPs与产蛋性能相关性研究

论文摘要

促卵泡激素(Follicle-stimulating hormone,FSH)是由垂体前叶分泌的糖蛋白类促性腺激素,在下丘脑—垂体—性腺繁殖轴中起到重要的作用。FSH由α和β两个亚基组成,其中α亚基为hCG、LH、TSH等糖蛋白激素所共有;而特异性的β亚基则决定其特异性结合位点及其生物学功能。研究表明,禽类FSH表达量的高低与家禽的繁殖性能密切相关,FSHβ可作为与产蛋性能相关的候选基因之一。本研究以我国优良的中型鹅品种——皖西白鹅(n=112)和引入的莱茵鹅(n=64)为研究素材,以FSHβ基因作为与产蛋性状的候选基因,通过比较基因组学方法,应用Dnastar和Primer Premier 5.0软件,根据GenBank登录的鸡FSHβ(GenBankAccession no.AF467082)、猪FSHβ(GenBank Accession no.D00621)、牛FSHβ(GenBank Accession no.M83753)、鼠FSHβ(GenBank Accession no.U12932)基因的序列,共设计了2对引物,对鹅FSHβ基因的Exon2下游至Exon3上游的序列及外显子3的部分序列进行了克隆测序;运用PCR-SSCP法检测皖西白鹅和莱茵鹅FSHβ基因外显子3基因突变位点,并分析基因多态性及其与皖西白鹅产蛋性状间的相关性。克隆了皖西白鹅和莱茵鹅FSHβ基因部分序列(GenBank登录号:EU252532)。序列比较表明,皖西白鹅FSHβ基因片段与莱茵鹅的同源性分别为99%,与家鸡的同源性为64%;克隆的外显子3部分序列与家鸡序列同源性为95%。对皖西白鹅和莱茵鹅FSHβ基因外显子3部分序列分别进行了多态性检测,结果表明,外显子3扩增片段经SSCP检测均发现1个SNP位点(C-126T)。群体遗传学分析表明,皖西白鹅P2引物检测的两个等位基因,频率分别为0.87和0.13,三种基因型(AA、AB和BB)频率分别为0.78、0.19和0.03,经x2适合度检验,群体在该位点处于Hardy-Weinberg平衡状态。莱茵鹅P2引物检测的等位基因频率分别为0.26和0.74;其对应的基因型(CC、CD、DD)频率分别为0.11、0.3和0.59,经x2检验,该位点处于Hardy-Weinberg平衡状态。相关分析表明,在皖西白鹅群体中,P2引物检测出的三种基因型与产蛋性能间有显著差异(P<0.05),BB型产蛋量显著高于AA型和AB型。莱茵鹅群体P2引物的三种基因型与产蛋性能间有显著差异(P<0.05),CC型产蛋量显著高于CD型和DD型。

论文目录

  • 摘要
  • ABSTRACT
  • 目录
  • 本论文中所用缩略词
  • 文献综述
  • 1 促卵泡激素研究进展
  • 1.1 促卵泡激素及其生物学效应
  • 1.2 FSHβ基因的表达调控
  • 1.3 FSHβ基因结构
  • 1.4 FSHβ亚基基因突变与生殖关系的研究
  • 2 PCR-SSCP技术和SNPs
  • 2.1 PCR-SSCP技术
  • 引言
  • 1 材料与方法
  • 1.1 试验材料
  • 1.1.1 试验样本
  • 1.1.2 主要仪器设备
  • 1.1.3 药品和酶
  • 1.1.4 常规溶液及试剂配制
  • 1.1.5 菌株和载体
  • 1.1.6 分析工具软件
  • 1.2 实验方法
  • 1.2.1 血样的采集
  • 1.2.2 DNA提取
  • 1.2.3 DNA浓度和纯度测定
  • 1.2.4 引物设计
  • 1.2.5 最佳PCR条件的建立
  • 1.2.6 琼脂糖凝胶电泳检测
  • 1.2.7 单链构像多态性检测(SSCP)
  • 1.2.8 FSHβ基因序列克隆和测序
  • 1.2.9 数据统计分析方法
  • 2 结果与分析
  • 2.1 FSHβ基因保守区序列的克隆与测序
  • 2.1.1 皖西白鹅与莱茵鹅FSHβ基因保守区序列PCR扩增
  • 2.1.2 皖西白鹅、莱茵鹅和家鸡FSHβ基因保守区序列测定及同源性比较
  • 2.2 FSHβ基因外显子3部分序列SSCP检测结果
  • 2.2.1 皖西白鹅SSCP电泳结果
  • 2.2.2 莱茵鹅SSCP电泳结果
  • 2.2.3 皖西白鹅和莱茵鹅外显子3有多态性片段的测序
  • 2.3 皖西白鹅与莱茵鹅氨基酸比较
  • 2.4 皖西白鹅与莱茵鹅外显子3部分序列酶切位点的比较
  • 2.5 基因群体遗传学分析
  • 2.5.1 FSHβ基因频率和基因型频率
  • 2.5.2 FSHβ基因Hardy-Weinberg平衡检验
  • 2.5.3 FSHβ基因的遗传特性分析
  • 2.5.4 基因多态性位点与鹅产蛋性能的相关性分析
  • 3 讨论
  • 3.1 鹅FSHβ基因部分序列的比较分析
  • 3.2 鹅FSHβ基因外显子3突变及其多态分析
  • 3.3 鹅FSHβ基因群体遗传结构分析
  • 3.4 鹅FSHβ基因型与产蛋性能的相关性分析
  • 4 结论
  • 参考文献
  • 致谢
  • 作者简介
  • 相关论文文献

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