安徽砀山酥自然保护区梨种质资源的ISSR研究

论文摘要

ISSR（简单重复序列区间）属于一种新的分子标记技术,是根据基因组内普遍存在的微卫星基序设计单一引物,对基因组DNA进行扩增,扩增的指纹图谱可以同时提供基因组内多个位点的序列信息,被广泛应用于构建分子遗传图谱、鉴定资源类型、探讨不同生物型之间的亲缘关系。目前国内已有不少关于果树植物ISSR研究,有关梨树资源的ISSR研究尚未见报道。本文采用ISSR技术,对安徽砀山酥梨自然保护区梨种质资源26个生物型进行研究,对合理利用资源、加快梨育种进程有着重要的意义。研究主要结果如下:1、从适合植物ISSR分析的45条引物中筛选出了16条适合梨树ISSR分析的引物,即:Z01、Z04、Z07、Z08、Z09、Z11、Z12、Z13、Z14、Z15、Z16、Z23、Z25、Z29、Z30、Z32。2、建立了适合梨基因组DNA的ISSR-PCR反应最佳体系如下:总体积25μl,其中10x Buffer 2.5μL、Taq酶0.5U、Mg2+2.0 mmol/L、引物0.5μmol/L、模板DNA40ng、dNTPs 0.20 mmol/L。3、利用5条引物扩增的特异带构建了供试的梨不同生物型DNA指纹图谱,可以区分26个样品中的11个生物型;利用8条引物扩增的条带组合构建的指纹图谱,可以将全部26个生物型完全分开。4、16条引物扩增出了174条清晰稳定的ISSR条带,平均每条引物扩增出了11条ISSR条带,其片段大小为200 bp～2000 bp,150条为多态性条带,平均多态性比率为86.2%,引物Z01、Z04及Z25扩增的条带多态性比率为100%,引物Z09扩增的条带多态性为55.6%。5、将聚类分析结果进行F检验,当取距离系数阀值为0.703～0.798时,全部供试生物型分为8类,各类之间遗传距离差异达极显著水平,分类最为合理。第1类有砀山酥梨及其8个营养系变异类型、鹅黄、早美酥、红香酥、细皮酥、慈梨、库尔勒香梨、新高、黄冠,聚类距离系数为0.703;第2类是南果梨;第3类包括丰水、鸭梨、紫酥梨;第4类为马蹄黄;第5类包括香面梨、雪花梨;第6、第7、第8类分别为伏酥、杜梨、红巴梨。6、与砀山酥梨相比,其8个营养系变异类型均出现了特异条带。其中,细皮酥30条、良梨早酥与扁酥27条、王酥21条、油皮酥14条、锈酥13条、八怪酥12条、棱酥3条。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 目录
• 1 文献综述
• 1.1 关于梨属植物
• 1.1.1 梨属植物的起源和分布
• 1.1.2 现代梨属植物分类史
• 1.1.3 梨属植物的研究进展
• 1.2 安徽砀山酥梨自然保护区梨种质资源的地位
• 1.3 近年来分子标记技术的国内外研究进展
• 2 引言
• 2.1 安徽砀山酥梨保护区梨种质资源研究的内容、目的及意义
• 2.2 技术路线
• 3 材料与方法
• 3.1 材料
• 3.2 仪器与试剂
• 3.2.1 主要仪器
• 3.2.2 主要试剂
• 3.3 方法
• 3.3.1 基因组DNA的提取方法
• 3.3.2 引物设计
• 3.3.3 引物筛选
• 3.3.4 ISSR-PCR反应条件的优化
• 3.3.5 扩增产物的琼脂糖凝胶电泳
• 3.3.6 扩增产物的6%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳
• 3.3.7 电泳图谱分析
• 4 结果与分析
• 4.1 引物筛选
• 4.2 ISSR反应体系的建立
• 2+浓度对ISSR反应的影响'>4.2.1 DNA Taq酶与Mg²⁺浓度对ISSR反应的影响
• 4.2.2 引物和模板DNA浓度对ISSR反应的影响
• 4.2.3 dNTPs对ISSR反应的影响
• 4.2.4 ISSR反应体系的建立
• 4.3 两种凝胶电泳方法的比较
• 4.4 砀山地区梨种质资源ISSR分析
• 4.4.1梨树ISSR遗传多样性分析
• 4.4.2 砀山地区梨种质资源指纹图谱的建立
• 4.4.3 聚类分析
• 4.4.4 芽变的鉴定
• 5 讨论
• 5.1 ISSR的高效性和多态性
• 5.2 砀山地区梨种质资源ISSR技术体系的建立
• 5.2.1 适宜梨树的ISSR分析的引物
• 5.2.2 适宜梨树的ISSR分析体系
• 5.3 梨树的ISSR指纹图谱的建立
• 5.4 砀山酥梨的归属问题
• 6 结论
• 6.1 适合梨树的ISSR分析的引物
• 6.2 适合于梨树分析的ISSR技术体系
• 6.3 梨树的ISSR指纹图谱的建立
• 6.4 遗传多样性分析
• 6.5 聚类分析结果
• 6.6 砀山酥梨变异品种ISSR鉴定结果
• 参考文献
• 附录A 安徽砀山梨种质资源ISSR图谱
• 附录B 砀山梨种质资源欧氏距离平方系数表
• 附录C 聚类秩序表
• 致谢
• 作者简介