半枝莲、白花蛇舌草及其药对提取物抗氧化及清除自由基活性研究

论文摘要

半枝莲,为唇形科植物半枝莲Scutellaria barbata D.Don的干燥全草,现代临床用于治疗癌症、肝炎等病,疗效确切。白花蛇舌草为茜草科一年生草本植物白花蛇舌草Hedyotis（Oldenlandia）diffusa（Willd.）Roxb.的全草,现代临床内服多用于治疗恶性肿瘤、炎症等疾病,疗效显著。二者在长期的临床实践中常以药对的形式用于临床癌症治疗,疗效确切,提示半枝莲和白花蛇舌草药对可能含有较强的抗癌活性新成分和/或新组分。第一章简单介绍了药对在中药现代化研究中的重要作用及由药对入手研究中药方剂配伍规律的可行性;并对半枝莲及白花蛇舌草两种临床常用中药材化学成分、抗肿瘤机理及临床应用的研究现状及进展进行了综述。第二章主要介绍了半枝莲、白花蛇舌草及其药对粗提物的制备以及药对有机相提取部位组分化方法并建立了组分的化学指纹图谱库,为各种生物活性的筛选提供了大量的组分及信息资源;并测定了各提取物浸膏得率及总酚、总黄酮含量。第三章采用四种化学模型研究了半枝莲、白花蛇舌草及其药对提取物抗氧化及清除自由基活性。半枝莲、白花蛇舌草及其药对不同溶剂提取物黄酮组成及含量存在一定差异,与之相应三种提取物抗氧化及清除自由基能力之间亦存在着较大差异,表明提取物抗氧化活性与其黄酮组成及含量有一定相关性。第四章比较了两种单药材及其药对混合有机溶剂提取物的抗氧化及清除自由基活性的差异,探讨药对组方对提取物活性物质含量、组成及生物活性的影响,并对药对的抗癌作用机理进行初步推测。药对组方后其还原能力、清除DPPH及·OH自由基能力均未出现显著增强,而其螯合Fe2+能力以及保护DNA免受自由基损伤能力出现较显著的增强,提示其抗癌作用机制可能与其对过渡金属离子的螯合作用以及对DNA损伤的保护作用有关,而与其还原性、清除DPPH以及清除·OH自由基能力相关性不大。第五章采用统计学方法研究了半枝莲、白花蛇舌草及其药对各提取物抗氧化活性与总酚及总黄酮含量之间的相关性。采用UV,LC-MS,MS/MS对半枝莲三种提取物各组分结构进行鉴定表征,并进一步探讨其抗氧化活性与特定结构的黄酮组分之间的相关性。结果表明提取物还原能力及清除DPPH、·OH自由基能力均与其总黄酮含量,特别是木犀草素含量有较显著的相关性,与其总酚含量及芹菜素含量亦有一定的相关性,而其对Fe2+的螯合能力则可能与黄芩素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷及黄芩苷组分的存在与否有一定关系。

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摘要

ABSTRACT

第1章引言

1.1 药对

1.1.1 从药对入手研究方剂现代化的依据及可行性

1.1.2 药对与方剂配伍的关系

1.2 半枝莲

1.2.1 本草考证

1.2.2 半枝莲化学成分研究进展

1.2.3 半枝莲抗肿瘤作用机制

1.2.4 半枝莲的临床应用

1.3 白花蛇舌草

1.3.1 本草考证

1.3.2 白花蛇舌草化学成分研究进展

1.3.3 白花蛇舌草抗肿瘤机制研究

1.3.4 白花蛇舌草的临床应用

1.4 半枝莲与白花蛇舌草药对临床应用

1.5 结语

1.6 研究目的和意义

1.7 研究内容

1.7.1 半枝莲、白花蛇舌草及其药对提取物的制备

1.7.2 相关抗氧化模型的建立及有机相提取物抗氧化、抗癌活性筛选

1.7.3 半枝莲和白花蛇舌草药对活性提取物组成成分表征及构效关系探讨

第2章半枝莲、白花蛇舌草及其药对提取物组分库的构建

2.1 仪器与材料

2.2 实验方法

2.2.1 半枝莲不同溶剂提取物的制备

2.2.2 白花蛇舌草不同溶剂提取物的制备

2.2.3 半枝莲与白花蛇舌草药对不同溶剂提取物的制备

2.2.4 半枝莲与白花蛇舌草药对有机相提取物的中试制备

2.2.5 半枝莲和白花蛇舌草药对提取物组分库的构建

2.2.6 总黄酮含量的测定

2.2.7 总多酚含量的测定

2.2.8 半枝莲、白花蛇舌草及其药对提取物的RP-HPLC表征

2.2.9 统计学分析

2.3 结果与讨论

2.3.1 药对有机相提取物库的RP-HPLC表征

2.3.2 各提取物的提取率

2.3.3 各提取物的总黄酮及总多酚含量

2.3.4 不同溶剂对半枝莲、白花蛇舌草及其药对总酚及总黄酮提取效率的影响

2.4 结论

第3章半枝莲、白花蛇舌草及其药对提取物抗氧化活性研究

3.1 仪器与材料

3.2 实验方法

3.2.1 半枝莲、白花蛇舌草及其药对提取物的制备

3.2.2 抗氧化及清除自由基活性研究

3.2.3 统计学分析

3.3 结果与讨论

3.3.1 半枝莲提取物抗氧化及清除自由基活性

3.3.2 白花蛇舌草提取物抗氧化及清除自由基活性

3.3.3 药对提取物抗氧化及清除自由基活性

3.4 结论

第4章药对配伍对抗氧化活性的影响

4.1 实验方法

4.1.1 半枝莲、白花蛇舌草及其药对提取物的制备

4.1.2 半枝莲、白花蛇舌草及其药对提取物的RP-HPLC表征

4.1.3 提取物对羟基自由基间接损伤DNA的保护作用

4.1.4 统计学分析

4.2 结果与讨论

4.2.1 药对组方对提取率及总黄酮含量的影响

4.2.2 药对组方对提取物抗氧化活性的影响

4.3 结论

第5章抗氧化活性与有效组分相关性研究

5.1 实验方法

5.1.1 统计学分析

5.1.2 RP-HPLC条件

5.1.3 LC-MS条件

5.1.4 MS/MS条件

5.2 结果与讨论

5.2.1 提取物总黄酮与总酚含量相关性

5.2.2 还原能力与总黄酮及总酚含量的相关性

5.2.3 清除DPPH自由基能力与总黄酮及总酚含量的相关性

5.2.4 清除羟基自由基能力与总黄酮及总酚含量的相关性

2+能力与总黄酮及总酚含量的相关性'>5.2.5 螯合Fe²⁺能力与总黄酮及总酚含量的相关性

5.2.6 半枝莲提取物的RP-HPLC表征

5.2.7 半枝莲提取物化学组分的结构鉴定

5.2.8 半枝莲提取物各组分的含量

5.2.9 半枝莲提取物各组分含量与抗氧化活性相关性

致谢

参考文献:

2谱图'>附录A 黄芩素-4′-O-β-D-葡萄糖醛酸苷MS²谱图

附录B 芹菜素-4′-O-β-D-葡萄糖醛酸苷UV、MS谱图

2谱图'>附录C 黄芩素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷MS²谱图

2谱图'>附录D 黄芩苷MS²谱图

2谱图'>附录E 木犀草素MS²谱图

2谱图'>附录F 芹菜素MS²谱图

攻读学位期间的研究成果

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