转Hu-IFN-α基因草鱼雌核发育F1代的遗传分析

论文摘要

草鱼是我国淡水养殖的主要品种,但由于其病害多、成活率低的特点严重制约了水产养殖业的发展,尤其是病毒性的草鱼出血病,它流行季节长,发病死亡率高,每年给我国的淡水养殖业造成了巨大的经济损失。因而,草鱼抗病育种一直以来都是我国水产工作者研究的重点。1998、1999年以章怀云教授带领的课题组通过分子重组,将人-α-干扰素（Hu-IFN-α）基因编码序列克隆到鲤鱼β-肌动蛋白基因启动子下游,构建了能够在鱼体内组成型表达的Hu-IFN-α基因重组分子。然后通过显微注射法将Hu-IFN-α重组基因注射入草鱼1-2细胞期的受精卵内,从而开始了转基因草鱼抗病育种的研究。2000年对转Hu-IFN-α基因草鱼接种草鱼出血病病毒（GCRV991）进行攻毒实验,实验表明其抗性比普通草鱼提高了66%。但是目前的转基因技术还无法使外源基因在鱼体内进行定点整合,对外源基因在鱼体内的整合形式也还缺乏更多的研究。为了进一步研究外源基因向F1代传递过程中的遗传表达情况,建立稳定遗传的转基因抗病草鱼纯系。本实验首先利用人工雌核发育技术获得转Hu-IFN-α基因草鱼雌核发育F1代群体,然后分析Hu-IFN-α基因在雌核发育F1代的遗传表达情况;再结合鱼类人工性别控制技术和分子标记技术完成转Hu-IFN-α基因抗病草鱼纯系的初步建立。具体实验结果如下: 1、通过人工雌核发育技术成功获得了转人α-干扰素基因抗病草鱼雌核发育F1代鱼苗79尾,其中由3号亲本F1代鱼苗有67尾;在雌核发育二倍体诱导方法中,利用热休克法诱导雌核二倍体的平均诱导率为9.7%,利用冷休克法的平均诱导率为4.8%。 2、将转人α-干扰素基因抗病草鱼3号亲本的雌核发育F1代67尾鱼苗分成两部分,其中30尾进行普通培育,37尾投喂性激素进行转生理雄性培育,培育

论文目录

• 中文摘要
• 外文摘要
• 前言
• 1 研究的目的和意义
• 2 外源基因在受体鱼内整合、表达和遗传研究
• 2.1 外源基因在受体鱼胚胎发育过程中的行为
• 2.2 外源基因在受体鱼基因组内的整合
• 2.3 外源基因在受体鱼中的遗传
• 2.4 外源基因在受体鱼中的表达
• 3 转Hu-IFN-α基因抗病草鱼的研究概况
• 4 鱼类人工雌核发育的研究进展
• 4.1 雌核发育的原理和技术
• 4.2 鱼类雌核发育的应用
• 5 水产动物性别控制的研究进展
• 5.1 水产动物性别决定的特点
• 5.2 水产动物人工性别控制的途径
• 5.3 水产动物人工性别控制的应用
• 6 RAPD技术及其在水产动物遗传育种上的研究进展
• 6.1 RAPD技术的基本原理及特点
• 6.2 RAPD技术在水产动物遗传育种上的研究应用
• 材料与方法
• 1.材料
• 1.1 实验鱼
• 1.2 带有质粒PCI的菌种TOP10F′
• 1.3 主要仪器设备
• 1.4 试剂盒
• 1.5 酶制剂
• 1.6 主要化学试剂
• 1.7 主要耗材
• 1.8 试剂配制
• 2.实验方法
• 2.1 转Hu-IFN-a基因草鱼的雌核发育
• 2.2 雌核发育F1代个体的人工性别控制
• 2.3 转基因草鱼雌核发育F1代中Hu-IFN-a基因的检测
• 2.4 转基因草鱼雌核发育F1代的遗传配型分析
• 结果与分析
• 1.转Hu-IFN-a基因草鱼的雌核发育
• 2.转基因草鱼雌核发育F1代“受精卵”的孵化与子一代的培育
• 3.转基因草鱼雌核发育F1代个体转生理雄性培育
• 4.转基因草鱼雌核发育F1代的PCR阳性检测
• 5.转基因草鱼雌核发育F1代的遗传配型分析
• 讨论
• 1.关于转Hu-IFN-a基因草鱼的雌核发育
• 2.关于转基因草鱼雌核发育F1代中Hu-IFN-a基因的遗传和表达情况
• 3.关于转基因草鱼雌核发育后代的人工性别控制
• 4.关于RAPD技术及反应体系
• 5.转基因草鱼雌核发育F1代的遗传配型分析
• 6.关于建立鱼类纯系的研究
• 结论、创新与后续工作
• 参考文献
• 致谢
• 作者简介