固本克喘膏含药血清对体外培养大鼠气道平滑肌细胞增殖和凋亡的影响

论文摘要

目的 研究固本克喘膏含药血清对体外培养大鼠气道平滑肌细胞（airway smooth muscle cells,ASMCs）增殖和凋亡的影响及机制,探讨哮喘“夙根”与“气道重建（airway remodeling,ARM）”之间的相关性,阐明儿童哮喘的可逆性及机理,为临床采用消补兼施之法抗小儿哮喘复发提供依据。 方法 采用含10%胎牛血清的DMEM原代培养SD大鼠ASMCs,第4～7代细胞用于实验,分别应用四唑盐比色法（MTT法）观察固本克喘膏含药血清对体外培养大鼠ASMCs生长及IL-4刺激大鼠ASMCs所建立增殖模型的干预效应。用光镜观察药物诱导的形态学改变,通过碎片DNA原位末端标记技术（TUNEL）检测凋亡细胞的百分率。 结果①20μL固本克喘膏高、中剂量含药血清对普通培养条件下的ASMCs生长均有抑制作用（P<0.05或P<0.01）。②与对照组比,IL-4有明显促ASMCs增殖作用（P<0.01）。IL-4+固本克喘膏高剂量含药血清组、IL-4+固本克喘膏中剂量含药血清组、IL-4+DXM含药血清组、IL-4+INF-γ组均比IL-4组、IL-4+空白血清组OD值降低（P<0.05）,但组间差异无显著性。③光镜观察显示,固本克喘膏高、中剂量含药血清诱导后,大鼠ASMCs细胞皱缩,膜出泡,核缩小,染色质浓聚和核破裂。④用固本克喘膏高剂量含药血清处理后的凋亡指数显著高于对照组和空白血清组（P均<0.01）。 结论 固本克喘膏可抑制体外培养大鼠ASMCs的增殖,通过抑制IL-4促ASMCs增殖模型作用,诱导大鼠ASMCs凋亡,从而干预哮喘ARM的发生发展,在一定程度上说明了哮喘的可逆性。

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 一、前言
• 二、实验研究
• （一） 实验材料
• 1.动物
• 2.药品
• 3.主要试剂
• 4.主要器材
• 5.主要溶液配制
• （二） 实验方法
• 1.固本克喘膏的制备
• 2.含药血清的制备
• 3.ASMCs的培养和鉴定
• 4.含药血清对大鼠ASMCs增殖的影响（MTT法）
• 5.含药血清对IL-4促大鼠ASMCs增殖模型的干预作用（MTT法）
• 6.含药血清对大鼠ASMCs凋亡的影响
• （三） 统计方法
• （四） 实验结果
• 1.ASMCs的生物学特性
• 2.MTT法测定含药血清对ASMCs增殖的影响
• 3.MTT法观察含药血清对IL-4促ASMCs增殖细胞模型的影响
• 4.含药血清对大鼠ASMCs凋亡的影响
• 4.1 光镜形态学观察
• 4.2 原位末端标记
• （五） 分析与讨论
• 1.哮喘“夙根”与“气道重建”之间的相关性
• 2.固本克喘膏组方分析
• 3.固本克喘膏含药血清对大鼠ASMCs作用机理的评价
• 3.1 含药血清对大鼠ASMCs增殖的作用
• 3.2 含药血清对IL-4促大鼠ASMCs增殖细胞模型的干预作用
• 3.3 含药血清对大鼠ASMCs凋亡的作用
• 4.研究展望
• （六） 小结
• 三、结论
• 参考文献
• 附图
• 致谢
• 文献综述