长江中下游地区猪繁殖与呼吸综合征流行病学调查及其在规模猪场的防控

论文摘要

猪繁殖与呼吸综合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome, PRRS）是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRS virus, PRRSV）引起的一种以妊娠母猪严重繁殖障碍,仔猪的呼吸道症状和高死亡率为特征的传染病。PRRSV对猪肺泡巨噬细胞有严格嗜性,抗原性极易发生变异,最终导致了目前流行的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株的产生。目前用于预防PRRS的疫苗主要是传统的弱毒苗和灭活苗,弱毒苗可诱导机体产生高水平的细胞免疫和体液免疫,世界多数国家普遍采用弱毒疫苗用于控制PRRS；灭活苗安全性虽好,但需多次接种,而且免疫效果不确实。弱毒苗的安全性和有效性逐步为我国养猪业界认可。2005年-2007年,对长江中下游地区湖北、湖南、江西、安徽、江苏、浙江和上海的108个规模化养猪场（母猪头数600头以上）进行PRRS流行病学调查。共采集2459份血样,使用IDEXX公司PRRS抗体检测试剂盒进行抗体检测,并对不同地区、不同年龄阶段以及不同年份的血清学结果数据进行统计学分析。检测结果表明,所有送检猪场都有PRRSV抗体阳性样品,样本阳性率93.70%（2304/2459）。其中种猪、商品猪、育肥猪、仔猪的阳性率分别为95.6%、89.4%、92.0%、90.6%,2005年检测猪群PRRSV抗体的阳性率为91.1%,2006年为94.8%,2007年达到96.10%,呈逐年递增的趋势,显示我国长江中下游地区PRRS的危害还在日渐加剧。根据GenBank公布的猪繁殖与呼吸综合征病毒基因组的核苷酸序列设计合成引物,建立了用于检测PRRSV的RT-PCR方法。应用该方法对127份来自于长江中下游地区（江苏、上海、浙江、湖北、江西及湖南）猪场的患繁殖障碍或呼吸道疾病的病料进行了PRRSV与其它繁殖障碍疾病（PRV、CSFV、PCV-2、PPV及JEV）的检测。结果表明,127份样品中仅有10份样品表现为PRRSV单独感染,占检测样品数的7.9%；有95份表现为PRRSV与PPV混合染,占样品总数的74.8%；50份样品检测为PRRSV与PCV-2混合感染,占样品总数的39.37%；15份病料表现为PRRSV与PRV混合感染,占样品总数的11.81%；8份病料表现为PRRSV与JEV混合感染,阳性率为6.29%；PRRSV与CSFV均为阳性的为18份,占样品总数的14.17%。另外,还有一定比例的多重感染。结果显示,猪群中PRRSV与PPV、PRV、PRRSV、PCV-2之间的混合感染现象比较普遍。PRRSV可划分为美洲型（代表毒株为：ATCC VR-2332）和欧洲型（代表毒株为：LV）两者基因型,两者组核苷酸序列同源性约为60%,其中ORF5同源性仅为54%。研究表明：由PRRSV ORF5、ORF6、ORF7分别编码的囊膜糖蛋白（E）、膜蛋白（M）、核衣壳蛋白（N）是PRRSV的三种主要结构蛋白,不同国家和地区的分离株的ORF5基因序列差异较大。本研究通过对长江中下游不同地区分离毒株三种结构蛋白的基因序列进行分析,并将其与国内其它PRRSV分离毒株以及美洲型VR-2332株和LV株进行了序列比较和分析。结果表明：长江中下游地区PRRSV分离株ORF5基因与VR-2332、LV、BJ-4、CH-la、HB-1、WSV等参考型株核苷酸序列同源性为88.9%～90.2%、63.3%～64.2%、88.1%～89.4%、95%～96%、96.4%～97.2%、89.1%～90.9%；氨基酸同源性为87.1%～90%、55.7%～57.2%、85.1%～88.1%、91.5%～94.5%、93.5%～96%、88.1%～90.0%。根据PRRS的流行病学特征并结合本课题的研究结果,建立了PRRS的血清学诊断和临床诊断并重的综合诊断方法,从而更适用于实际生产中PRRS的诊断,从而为有效地防控PRRS提供科学依据；同时从饲养管理、免疫预防、生物安全及控制继发或混合感染等方面针对性的制定一套综合防控措施,并且在长江中下游地区部分养猪场进行了实施。结果显示,通过建立合理的PRRS免疫程序并及时的对猪进行免疫预防、提高鉴别诊断水平、防止其他疾病混合感染、强化生物安全等防控措施,实际生产中PRRS的感染率、发病率以及病死率均有明显下降,在一定程度上控制了该病的流行与传播,取得了显著的经济效益与社会效益。将制订的综合防控措施,成功在长江中下游地区的四个规模化养猪场进行实施,对这四个猪场分别从猪场资料了解,临床症状观察,血清样品采集及抗体检测等方面入手,建立了PRRS的综合诊断措施,提出了合理的疫苗免疫方案和处理措施。PRRS综合防控措施的实施：获得明显成效,猪场全群死胎率、断奶前死亡率、保育死亡率和生长-肥育猪死亡率明显降低。在长江中下游地区的129个规模化养猪场的实施表明：PRRS的综合防控措施的实施,也得到了同样的效果,从而可有效促进了我国养猪业的健康发展,收到良好的经济效益。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 英文缩略词表
• 第一篇 文献综述
• 第一章 猪繁殖与呼吸综合征及其研究进展
• 1 猪繁殖与呼吸综合征病毒的历史及分类
• 2 猪繁殖与呼吸综合征的流行病学及致病机理
• 3 猪繁殖与呼吸综合征病毒的生物学研究进展
• 3.1 病毒的生物学特性
• 3.2 病毒的基因组结构
• 3.3 病毒基因组的转录及表达
• 3.4 病毒基因组编码蛋白
• 3.5 PRRSV结构蛋白的抗原性
• 4 猪繁殖与呼吸综合征病毒的变异
• 参考文献
• 第二章 猪繁殖与呼吸综合征诊断方法研究进展
• 1 临床诊断
• 2 病毒学检查
• 2.1 病毒分离与鉴定
• 2.2 免疫荧光抗体染色技术的抗原检测
• 3 血清学试验
• 3.1 间接荧光抗体试验（IFA）
• 3.2 血清中和试验（SN）
• 3.3 酶联免疫吸附试验（ELISA）
• 3.3.1 间接ELISA
• 3.3.2 阻断ELISA
• 3.3.3 竞争ELISA
• 4 分子生物学诊断方法
• 4.1 核酸探针杂交技术
• 4.2 反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）技术
• 4.2.1 常规RT-PCR
• 4.2.2 套式PCR
• 4.2.3 RT-PCR微量比色法和RT-PCR-RFLP法
• 5 结语
• 参考文献
• 第三章 猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒免疫与疫苗研究进展
• 1 猪繁殖与呼吸综合征病毒的免疫
• 1.1 对PRRSV感染的先天性免疫应答
• 1.2 对PRRSV感染的立刻先天性细胞应答
• 1.3 PRRSV的体液免疫应答
• 1.4 细胞介导的对PRRSV的免疫
• 2 猪繁殖与呼吸综合征的疫苗
• 2.1 灭活疫苗
• 2.2 弱毒疫苗
• 2.3 基因工程疫苗
• 2.3.1 核酸疫苗
• 2.3.2 重组亚单位疫苗
• 2.3.3 重组活载体疫苗
• 3 展望
• 参考文献
• 第二篇 实验研究
• 第四章 长江中下游地区猪繁殖与呼吸综合征血清学调查
• 1 材料与方法
• 1.1 血清样本的收集
• 1.2 待检血清的准备
• 1.3 检测方法
• 2 结果
• 2.1 猪场及猪群的PRRSV感染情况
• 2.2 不同日龄、规模猪场猪繁殖与呼吸综合征抗体检测
• 2.3 不同年份保存血清猪繁殖与呼吸综合征抗体检测
• 3 讨论
• 参考文献
• 第五章 长江中下游地区猪繁殖与呼吸综合征病原学调查
• 1 材料和方法
• 1.1 实验材料
• 1.2 方法
• 1.2.1 引物设计和合成
• 1.2.2 组织病料的处理
• 1.2.3 组织病料RNA的提取
• 1.2.4 RT-PCR
• 1.2.5 病毒DNA模板的制备
• 1.3 PCR
• 1.3.1 PRV gE基因的扩增
• 1.3.2 PCV-2 ORF2基因片段的扩增
• 2 结果
• 2.1 RT-PCR结果
• 2.1.1 PRRSV基因片段的扩增
• 2.1.2 CSFV基因片段的扩增
• 2.1.3 PRV基因片段的扩增
• 2.1.4 PPV基因片段的扩增
• 2.1.5 PCV-2基因片段的扩增
• 3 讨论
• 参考文献
• 第六章 长江中下游地区猪繁殖与呼吸综合征分子流行病学调查
• 1 材料与方法
• 1.1 病料来源及处理
• 1.2 试剂和工具酶
• 1.3 细胞、载体和菌株
• 1.4 引物设计
• 1.5 病毒分离与培养
• 1.6 分离毒株总RNA的提取
• 1.7 RT-PCR
• 1.8 PCR产物回收
• 1.9 目的基因的克隆与序列测定
• 1.9.1 目的基因与载体的连接
• 1.9.2 DH5α感受态细胞的制备
• 1.9.3 连接产物的转化
• 1.9.4 碱裂解法小量提取重组质粒
• 1.9.5 重组质粒酶切鉴定和PCR鉴定
• 1.9.6 限制性长度多态性分析（RFLP）分析
• 2 结果
• 2.1 疑似病料的病毒分离
• 2.2 目的基因的扩增及酶切鉴定
• 2.3 PRRSV基因序列同源性
• 2.4 PRRSV基因进化树
• 3 讨论
• 参考文献
• 第七章 猪繁殖与呼吸综合征综合防控措施的制定
• 1 规模化猪场PRRS的综合防控管理措施
• 1.1 兽医卫生制度化
• 1.2 加强对引进猪的检疫
• 1.3 建立经常性消毒制度
• 1.4 坚持定期驱虫
• 1.5 加强日常管理
• 1.6 减少应激,加强饲养
• 2 规模化猪场PRRS的免疫预防措施
• 2.1 免疫预防规范化
• 2.2 PRRS免疫预防监测
• 2.3 PRRS的疫苗免疫
• 3 规模化猪场PRRS的综合诊断
• 3.1 血清学检测
• 3.2 规模化猪场的情况调查
• 4 规模化猪场PRRS疫情的处置
• 4.1 疫情诊断及处置
• 4.2 发病时的处理措施
• 4.2.1 检疫
• 4.2.2 隔离
• 4.2.3 不同对象猪的处理
• 4.2.4 对发病猪的治疗
• 4.2.5 淘汰
• 4.2.6 免疫
• 4.2.7 控制继发感染
• 5 在PRRS防控工作中存在的问题
• 5.1 对PRRS的认识不清
• 5.2 不注意选择正确的免疫程序
• 5.3 应积极做好对症治疗工作
• 5.4 片面强调疫苗防疫,忽视兽医卫生管理工作
• 5.5 注意鉴别诊断,以防误诊
• 参考文献
• 第八章 猪繁殖与呼吸综合征综合防控措施在长江中下游地区的实施及效果评价
• 1 PRRS综合防控措施在长江中下游地区的实施
• 1.1 PRRS综合性防控实施的案例
• 1.2 方案实施效果分析
• 1.3 蓝耳病疫苗免疫与高热症发病在长江中下游的调查
• 2 PRRS综合防控措施的实施效果分析
• 2.1 PRRS综合防控措施在长江中下游实施的第一个猪场案例
• 2.1.1 基本临床症状
• 2.1.2 数据分析
• 2.1.3 建议
• 2.2 PRRS综合防控措施在长江中下游实施的第二个猪场案例
• 2.2.1 基本资料
• 2.2.2 临床症状
• 2.2.3 临床剖检
• 2.2.4 蓝耳病血清抗体检测
• 2.2.5 结果和分析
• 2.2.6 预防和控制
• 2.2.7 PRRS综合性防控措施实施的评价
• 2.2.8 分析
• 2.3 PRRS综合防控措施在长江中下游实施的第三个猪场案例
• 2.3.1 基本资料
• 2.3.2 观察结果
• 2.3.3 蓝耳病血清抗体检测
• 2.3.4 剖检结果
• 2.3.5 建议
• 2.3.6 PRRSV感染状态分析
• 2.3.7 PRRS综合性防控措施实施的评价
• 2.4 PRRS综合防控措施在长江中下游实施的第四个案例
• 2.4.1 试验猪场Ingelvac（?）PRRS MLV免疫前后PRRS抗体水平的检测
• 2.4.2 试验猪场病毒阳性检出率的比较
• 2.4.3 试验猪场Ingelvac（?）PRRS MLV免疫前后分娩率比较
• 2.4.4 试验猪场免疫前后仔猪整体成活率比较
• 2.4.5 试验猪场母猪各项指标的比较
• 3 蓝耳病疫苗免疫与高热症发病在长江中下游的调查
• 4 讨论
• 参考文献
• 全文总结
• 攻读学位期间发表论文
• 致谢