本文主要研究内容
作者周莎莎（2019）在《PRV变异株与疫苗株主要糖蛋白的免疫原性差异分析》一文中研究指出：伪狂犬病(Pseudorabies,PR),也称为奥耶斯基氏病(Aujeszky’s disease,AD),是由伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)引起的一种以种猪繁殖障碍、新生仔猪大量死亡为特征的急性传染病。为了控制国内PR的流行,1979年中国从匈牙利引进了基因缺失疫苗Bartha-K61,PR得到了较好的控制。然而,自2011年末以来,国内许多传统疫苗Bartha-K61免疫的猪场频繁暴发PR,对养猪业造成了巨大的经济损失。研究表明,引起免疫猪场暴发PR的是一种PRV变异毒株,相比经典PRV,变异PRV表现出了更强的毒力和致病力。对国内新分离的PRV变异毒株进行系统的遗传演化分析,结果表明,国内流行的PRV变异株与国外流行株处于遗传演化的两个分支,指示PRV可能存在两种基因型。因此,我们提出猜想:与疫苗株相比,PRV变异株的主要保护性抗原基因可能发生了变异,结果导致疫苗株免疫不能有效抵抗PRV变异株的感染。于是,我们对本实验室分离到的PRV变异毒株JS-2012进行了生物信息学分析,结果表明:与疫苗株Bartha-K61相比,PRV变异株JS-2012的主要保护性抗原gB、gC和gD的氨基酸序列发生了不同程度的变异。为了探究保护性抗原gB、gC、gD的变异与Bartha-K61免疫不保护现象的关系,我们开展了以下研究。1.基因互换重组PRV的构建。使用CRISPR/Cas9与HDR结合的技术,以Bartha-K61和JS-2012-ΔgE/gI(参照Bartha-K61人工缺失gE和gI基因的JS-2012株)为骨架,成功构建了gB基因互换的重组病毒BJB和JBJ、gC基因互换的重组病毒Bar-JSgC和JS-BargC、gD基因互换的重组病毒Bar-JSgD和JS-BargD以及gB/gC/gD三基因同时互换的重组病毒Bar-JSgBgCgD和JS-BargBgCgD。2.重组PRV的体外生物学特性研究。基因替换的重组病毒与其亲本病毒的体外生物学特性较为相似。其中,与亲本毒株JS-2012-ΔgE/gI相比,JS-BargC在PK-15细胞上的复制能力显著降低。3.小鼠交叉免疫保护试验。将重组PRV及其亲本毒株Bartha-K61和JS-2012-ΔgE/gI分别制备成灭活疫苗,免疫小鼠,再攻击PRV变异株JS-2012。结果表明,gB替换显著地改变了其亲本病毒Bartha-K61或JS-2012-ΔgE/gI对变异株JS-2012攻击的交叉免疫保护效果;gC或gD替换对变异株JS-2012攻击的交叉免疫保护效果的影响不明显,荧光定量PCR的结果表明,gC和gD的变异在一定程度上改变了Bartha-K61的免疫原性。综上所述,本研究通过CRISPR/Cas9与HDR结合的技术,成功构建了gB、gC、gD单基因替换和多基因替换的PRV重组病毒,并通过小鼠免疫保护试验证明了gB替换能够显著改变Bartha-K61和JS-2012-ΔgE/gI的免疫原性,提示疫苗株免疫对变异株不保护现象与gB变异密切相关。gC和gD的变异在一定程度上改变了Bartha-K61的免疫原性。以上研究为揭示PRV毒株间变异和免疫逃避机制提供了理论基础。
Abstract
wei kuang quan bing (Pseudorabies,PR),ye chen wei ao ye si ji shi bing (Aujeszky’s disease,AD),shi you wei kuang quan bing bing du (Pseudorabies virus,PRV)yin qi de yi chong yi chong zhu fan shi zhang ai 、xin sheng zai zhu da liang si wang wei te zheng de ji xing chuan ran bing 。wei le kong zhi guo nei PRde liu hang ,1979nian zhong guo cong xiong ya li yin jin le ji yin que shi yi miao Bartha-K61,PRde dao le jiao hao de kong zhi 。ran er ,zi 2011nian mo yi lai ,guo nei hu duo chuan tong yi miao Bartha-K61mian yi de zhu chang pin fan bao fa PR,dui yang zhu ye zao cheng le ju da de jing ji sun shi 。yan jiu biao ming ,yin qi mian yi zhu chang bao fa PRde shi yi chong PRVbian yi du zhu ,xiang bi jing dian PRV,bian yi PRVbiao xian chu le geng jiang de du li he zhi bing li 。dui guo nei xin fen li de PRVbian yi du zhu jin hang ji tong de wei chuan yan hua fen xi ,jie guo biao ming ,guo nei liu hang de PRVbian yi zhu yu guo wai liu hang zhu chu yu wei chuan yan hua de liang ge fen zhi ,zhi shi PRVke neng cun zai liang chong ji yin xing 。yin ci ,wo men di chu cai xiang :yu yi miao zhu xiang bi ,PRVbian yi zhu de zhu yao bao hu xing kang yuan ji yin ke neng fa sheng le bian yi ,jie guo dao zhi yi miao zhu mian yi bu neng you xiao di kang PRVbian yi zhu de gan ran 。yu shi ,wo men dui ben shi yan shi fen li dao de PRVbian yi du zhu JS-2012jin hang le sheng wu xin xi xue fen xi ,jie guo biao ming :yu yi miao zhu Bartha-K61xiang bi ,PRVbian yi zhu JS-2012de zhu yao bao hu xing kang yuan gB、gChe gDde an ji suan xu lie fa sheng le bu tong cheng du de bian yi 。wei le tan jiu bao hu xing kang yuan gB、gC、gDde bian yi yu Bartha-K61mian yi bu bao hu xian xiang de guan ji ,wo men kai zhan le yi xia yan jiu 。1.ji yin hu huan chong zu PRVde gou jian 。shi yong CRISPR/Cas9yu HDRjie ge de ji shu ,yi Bartha-K61he JS-2012-ΔgE/gI(can zhao Bartha-K61ren gong que shi gEhe gIji yin de JS-2012zhu )wei gu jia ,cheng gong gou jian le gBji yin hu huan de chong zu bing du BJBhe JBJ、gCji yin hu huan de chong zu bing du Bar-JSgChe JS-BargC、gDji yin hu huan de chong zu bing du Bar-JSgDhe JS-BargDyi ji gB/gC/gDsan ji yin tong shi hu huan de chong zu bing du Bar-JSgBgCgDhe JS-BargBgCgD。2.chong zu PRVde ti wai sheng wu xue te xing yan jiu 。ji yin ti huan de chong zu bing du yu ji qin ben bing du de ti wai sheng wu xue te xing jiao wei xiang shi 。ji zhong ,yu qin ben du zhu JS-2012-ΔgE/gIxiang bi ,JS-BargCzai PK-15xi bao shang de fu zhi neng li xian zhe jiang di 。3.xiao shu jiao cha mian yi bao hu shi yan 。jiang chong zu PRVji ji qin ben du zhu Bartha-K61he JS-2012-ΔgE/gIfen bie zhi bei cheng mie huo yi miao ,mian yi xiao shu ,zai gong ji PRVbian yi zhu JS-2012。jie guo biao ming ,gBti huan xian zhe de gai bian le ji qin ben bing du Bartha-K61huo JS-2012-ΔgE/gIdui bian yi zhu JS-2012gong ji de jiao cha mian yi bao hu xiao guo ;gChuo gDti huan dui bian yi zhu JS-2012gong ji de jiao cha mian yi bao hu xiao guo de ying xiang bu ming xian ,ying guang ding liang PCRde jie guo biao ming ,gChe gDde bian yi zai yi ding cheng du shang gai bian le Bartha-K61de mian yi yuan xing 。zeng shang suo shu ,ben yan jiu tong guo CRISPR/Cas9yu HDRjie ge de ji shu ,cheng gong gou jian le gB、gC、gDchan ji yin ti huan he duo ji yin ti huan de PRVchong zu bing du ,bing tong guo xiao shu mian yi bao hu shi yan zheng ming le gBti huan neng gou xian zhe gai bian Bartha-K61he JS-2012-ΔgE/gIde mian yi yuan xing ,di shi yi miao zhu mian yi dui bian yi zhu bu bao hu xian xiang yu gBbian yi mi qie xiang guan 。gChe gDde bian yi zai yi ding cheng du shang gai bian le Bartha-K61de mian yi yuan xing 。yi shang yan jiu wei jie shi PRVdu zhu jian bian yi he mian yi tao bi ji zhi di gong le li lun ji chu 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自中国农业科学院的周莎莎，发表于刊物中国农业科学院2019-07-05论文，是一篇关于抗原变异论文,保护性抗原论文,中国农业科学院2019-07-05论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自中国农业科学院2019-07-05论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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