银杏内生真菌的分离及抑菌活性研究

论文摘要

植物内生真菌能够产生结构新颖、功能特殊的天然活性物质，是开发新型生物源农药的宝贵资源，在农业中具有广泛的应用前景。本文从银杏树中分离筛选得到2株内生真菌，编号为T-4和T-7，对几种重要的植物病原菌具有抑制作用，对其进行了生物学特性测定和代谢产物抑菌活性研究。主要研究结果如下：1.采用组织分离法，从银杏的茎、叶片和根皮组织内分离得到26株内生真菌。通过对峙试验，测定了26株内生真菌对辣椒疫霉病菌（Phytophthora capsici），番茄枯萎病菌（Fusarium oxysporum），苹果腐烂病菌（Cytospora mandshurica），苹果炭疽病菌（Colletotrichum gloeosporioides），梨黑星病菌（Venturia pirina），小麦赤霉病菌（Fusarium graminearum）6种植物病原菌的拮抗作用。结果表明17株内生真菌对6种供试病原菌有不同程度的抑制作用。其中T-4和T-7菌株作用较明显，对6种病原菌抑菌率均达到50%以上，对苹果腐烂病菌均达到90%以上；T-7对辣椒疫霉病菌的抑制率也达到90%以上。T-4对番茄枯萎病菌抑制率则在85%。2.内生真菌T-4和T-7的分类鉴定结果显示二者同为镰孢属（Fusarium sp.）,其中T-7经分子生物学鉴定为为腐皮镰孢菌（Fusarium solani）。生物学特性研究测定了不同温度、光照、酸碱度及碳源、氮源和培养基条件下两株菌的生长情况。试验结果表明两株菌生长的适宜温度范围在28℃-32℃；T-4和T-7菌株分别适合在pH值为7-9和6-10范围内生长；葡萄糖和麦芽糖是T-4菌株生长的最适碳源，乳糖是T-7的最适碳源；T-4菌株生长适用的氮源是胰蛋白胨，T-7为硝酸钠； PDA或PSA是T-4菌株生长的适宜培养基，牛肉膏培养基对于T-7更为适用；两者皆不受光照条件影响。3.采用抑制菌丝生长速率法测定了26株内生真菌代谢产物的抑菌作用。经摇瓶发酵得到的菌丝，用乙酸乙酯萃取，得到的粗提物在200mg/L浓度下对供试病原菌的抑制作用较弱。发酵液对6种供试病原菌抑菌活性测定发现，T-4和T-7菌株发酵液表现出对苹果腐烂病菌、苹果炭疽病菌、梨黑星病菌和小麦赤霉病菌和番茄枯萎病菌的抑制作用，对苹果腐烂病菌的抑制率分别达到90%和85%以上。二者对辣椒疫霉病菌都没有表现出抑制作用。检测T-4、T-7菌丝发酵液在辣椒幼苗上的抑菌作用，结果表明T-7发酵液对感染辣椒疫霉的幼苗有23.17%的保护作用和15.43%的治疗作用，表现出一定的防治效果。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 文献综述
• 1.1 微生物农药
• 1.2 植物内生菌
• 1.2.1 植物内生菌的定义
• 1.2.2 植物内生真菌的生物多样性和普遍性
• 1.2.3 植物内生真菌与宿主的关系
• 1.3 植物内生真菌的开发与应用
• 1.3.1 内生真菌在医药方面的应用
• 1.3.2 生物防治
• 1.4 论文研究的目的及意义
• 第二章 内生真菌的分离筛选
• 2.1 材料
• 2.1.1 菌种分离材料
• 2.1.2 供试病原菌
• 2.1.3 培养基
• 2.1.4 主要试剂
• 2.1.5 主要仪器设备
• 2.2 方法
• 2.2.1 样品采集
• 2.2.2 内生真菌分离方法
• 2.2.3 消毒效果的验证
• 2.2.4 菌株筛选
• 2.3 结果与分析
• 2.3.1 内生真菌分离与纯化
• 2.3.2 活性菌株的筛选
• 2.4 小结与讨论
• 2.4.1 银杏内生真菌的分离
• 2.4.2 活性菌株的筛选
• 第三章 T-4 和 T-7 菌株鉴定及生物学特性研究
• 3.1 材料
• 3.1.1 供试内生真菌
• 3.1.2 生物学特性研究培养基
• 3.1.3 主要仪器设备
• 3.1.4 主要试剂
• 3.2 方法
• 3.2.1 内生真菌 T-4 和 T-7 分类鉴定
• 3.2.2 生物学特性研究
• 3.2.2.1 温度条件对菌落生长的影响
• 3.2.2.2 光照对菌落生长的影响
• 3.2.2.3 pH 值对菌落生长的影响
• 3.2.2.4 碳源对菌落生长的影响
• 3.2.2.5 氮源对菌落生长的影响
• 3.2.2.6 培养基对菌落生长的影响
• 3.3 结果与分析
• 3.3.1 T-4 和 T-7 菌株的分类鉴定
• 3.3.2 T-4 和 T-7 菌株生物学特性研究
• 3.3.2.1 温度对 T-4 和 T-7 菌株生长的影响
• 3.3.2.2 pH 值对菌株生长的影响
• 3.3.2.3 光照对菌株生长的影响
• 3.3.2.4 碳源对菌株生长的影响
• 3.3.2.5 氮源对菌株生长的影响
• 3.3.2.6 培养基对菌株生长的影响
• 3.4 小结与讨论
• 3.4.1 T-4 和 T-7 菌株分类鉴定
• 3.4.2 生物学特性研究
• 第四章 内生真菌代谢产物抑菌活性的研究
• 4.1 材料
• 4.1.1 菌种
• 4.1.1.1 供试病原菌
• 4.1.1.2 供试内生真菌
• 4.1.2 液体发酵培养基
• 4.1.3 主要仪器设备
• 4.1.4 主要试剂
• 4.2 方法
• 4.2.1 菌株发酵
• 4.2.2 菌丝提取物抑菌活性研究
• 4.2.3 菌株发酵液对供试病原菌抑制率测定
• 4.2.4 盆栽药效试验
• 4.3 结果与分析
• 4.3.1 菌丝体乙酸乙酯提取物抑菌活性
• 4.3.2 菌株发酵液抑菌活性研究
• 4.3.3 盆栽药效试验
• 4.4 小结与讨论
• 第五章 结论
• 5.1 银杏内生真菌的分离筛选
• 5.2 T-4 和 T-7 菌株的分类鉴定和生物学特性研究
• 5.3 菌株代谢产物抑菌活性的研究
• 参考文献
• 附图
• 致谢
• 作者简介
• 在读期间发表的论文