槲皮素对体外培养肝细胞胆固醇合成及外流的影响

论文摘要

目的:探讨植物化学物质槲皮素（Quercetin）对脂肪变性人肝L-02细胞脂滴形成、胆固醇合成限速酶HMG-CoA还原酶和三磷酸腺苷结合框转运子A1、G5、G8等胆固醇外流途径主要相关基因表达的作用及细胞内胆固醇、胆固醇酯含量的影响,了解槲皮素对肝细胞胆固醇合成及转运的作用,并探讨其作用机制。方法:取正常人肝L-02细胞,和经50%胎牛血清造模24小时建立的脂肪变性肝细胞模型,共同作为研究对象。实验分为8组:第一组为空白对照,即正常肝细胞组;第二组为脂肪变性肝细胞组;第三组至第六组在脂变细胞中分别加入不同剂量槲皮素,使槲皮素终浓度分别为10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L;第七组为药物对照组,即脂肪变性肝细胞加入普罗布考,使其终浓度为10μmol/L;第八组为正常肝细胞加20μmol/L槲皮素对照组。每组加药后继续孵育24小时。用MTT法观察槲皮素对脂肪变性人肝L-02细胞模型增殖的影响;油红O染色观察每组细胞内脂滴的形成情况;高效液相色谱法（HPLC）检测细胞内胆固醇（TC）、游离胆固醇（FC）和胆固醇酯（CE）的含量,并计算细胞内CE/TC比值及培养基FC含量;RT-PCR法检测每组肝细胞HMG-CoA还原酶及ABCA1、ABCG5、ABCG8 mRNA水平的表达;从而确定槲皮素降低细胞CE的最佳浓度,作出量效关系。然后以槲皮素的最佳浓度处理细胞不同的时间,即6小时、12小时、24小时、48小时,再分别检测各组细胞HMG-CoA还原酶和ABCA1、ABCG5、ABCG8mRNA水平的表达,高效液相色谱法检测细胞胆固醇含量,确定槲皮素降低细胞CE的最佳时间,作出时效关系。实验数据以±s表示,用SPSS13.0统计软件对数据进行统计分析,以P﹤0.05作为差异显著性标准。结果:经50%胎牛血清孵育24小时后,倒置显微镜下可观察到L-02细胞脂肪变性,胞浆内充满大量可被油红O红染的脂滴,且高效液相色谱法检测细胞内外胆固醇含量均明显增加（P﹤0.05）,示脂变肝细胞模型成功建立。经不同浓度的槲皮素（10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L）处理脂肪变性肝细胞24小时,结果显示:槲皮素对脂肪变性人肝L-02细胞增殖有明显抑制作用,油红O染色表明,细胞内脂滴较处理前减少。槲皮素呈浓度依赖性的降低脂变肝细胞细胞内TC、CE,增加培养基中FC含量,同时呈浓度依赖性的减少HMG-CoA还原酶的表达、增加ABCA1、ABCG5、ABCG8mRNA的表达。将40μmol/L的槲皮素与脂肪变性肝细胞共同处理6,12,24,48小时,结果显示:细胞内脂滴呈时间依赖性减少;槲皮素呈时间依赖性的降低脂变细胞内TC、CE,增加培养基中FC含量,同时呈时间依赖性的减少HMG-CoA还原酶的表达、增加ABCA1、ABCG5、ABCG8mRNA的表达。结论:1、脂肪变性人肝L-02肝细胞中总胆固醇及胆固醇酯的含量均增加;2、槲皮素能降低脂变人肝L-02细胞总胆固醇及胆固醇酯含量,增加游离胆固醇的外流;3、槲皮素降低胆固醇作用机制可能是通过下调胆固醇合成的限速酶HMG-CoA还原酶的表达,上调胆固醇转运的重要蛋白ABCA1、ABCG5、ABCG8等的表达,且其作用效果呈现一定的剂量依赖性和时间变化规律。

论文目录

• 主要英文缩略语索
• 中文摘要
• 英文摘要
• 正文
• 前言
• 实验材料和方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述
• 研究生学习期间完成的论文
• 致谢