桑叶中脱氧野尻霉素和白藜芦醇的提取及纯化工艺研究

论文摘要

桑叶中含有的DNJ（1-脱氧野尻霉素,1-deoxynojirimycin）有很高的药用价值,据研究表明DNJ是一种很好的降血糖物质。然而目前有关桑叶中DNJ的分离、纯化及药理研究不多。白藜芦醇因其具有丰富的生物活性,已保健品、化妆品领域有了很多产品,不过对桑叶中的白藜芦醇研究还稀有报道。本论文以桑叶为研究材料,在建立HPLC定量分析DNJ和白藜芦醇的基础上,重点开展桑叶中白藜芦醇的提取、DNJ的提取及纯化工艺研究,为桑叶功能成分综合开发利用,特别是为降血糖药品和保健品的研制奠定基础。主要研究结果如下：1、采用高效液相色谱对桑叶中的白藜芦醇的含量进行测定,确定了最佳分析条件：色谱柱Hypersil ODS C18 （150 mm×4.6 mm,5μm）,温度30°C，流速1mL/min,检测波长为298nm,流动相为甲醇：水,采用梯度洗脱：0-2.5-6.8-10min=3：7-6.4：3.6-3：7。根据回流提取法中对不同溶剂,乙醇浓度、料液比、提取时间及温度的单因素实验结果进行正交试验,确定桑叶白藜芦醇最佳提取条件为：提取溶剂为乙醇,回流时间为105 min,乙醇浓度为80%,料液比为1：13,回流温度为60℃。2、采用高效液相色谱仪对桑叶中DNJ的含量进行测定,确定了最佳分析条件：色谱柱Hypersil ODS （150 mm×4.6 mm,5μm）,30°C,流速0.8mL/min,检测波长为265nm,流动相为甲醇：0.1%醋酸=55：45（v/v）。同时对HPLC-DAD检测法与ELSD检测法进行了比较。结果表明两种方法之间没有显著性差异。本文使用的是HPLC检测法,并优化了HPLC柱前衍生法测定DNJ。3、根据回流提取法中的提取溶剂,乙醇浓度、料液比、提取时间、提取温度及pH值的单因素实验,进行正交试验,确定桑叶中DNJ最佳提取条件为：在70°C下,料液比为1：40,pH=6,乙醇浓度为80%,提取时间为2 h。4、通过静态吸附-解吸实验,对不同型号大孔树脂和聚酰胺纯化DNJ进行了比较,确定选择LSI-4大孔树脂,确定最佳纯化DNJ的工艺条件：上样浓度为0.48mg/mL,上样流速为2BV/h,洗脱液为60%乙醇,洗脱流速为2.5BV/h。该条件下,DNJ得到初步的纯化,经检测纯度可达到35.6%,得率为65%。5、选用D370阳离子树脂进一步纯化DNJ,确定最佳纯化条件为：上样流速为2BV/h,先用2BV蒸馏水洗涤后,用0.5moL/L氨水以2BV/h的流速进行洗脱。收集峰比较集中的洗脱液,得到纯化后DNJ纯度可达到80%,得率为61.3%。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 文献综述
• 1 桑叶的功能性成分
• 1.1 维生素
• 1.2 食物纤维
• 1.3 矿物质
• 1.4 黄酮类化合物
• 1.5 氨基酸
• 1.6 植物甾醇
• 1.7 生物碱
• 2 桑叶的药理作用
• 2.1 降血糖作用
• 2.2 降血脂作用
• 2.3 降血压作用
• 2.4 对消化系统的作用
• 2.5 抗衰老作用
• 2.6 抗病毒作用
• 2.7 对葡萄糖淀粉酶的抑制作用
• 2.8 防癌作用
• 3 桑叶中的DNJ
• 3.1 DNJ的结构
• 3.2 桑叶中DNJ的研究现状
• 4 桑叶中的白藜芦醇
• 5 立题依据和意义
• 第二章 桑叶中白藜芦醇提取工艺的研究
• 1 前言
• 2 材料与方法
• 2.1 试验材料
• 2.2 试验仪器、药品
• 2.3 试验方法
• 2.3.1 HPLC法测定白藜芦醇的含量
• 2.3.2 精密度试验
• 2.3.3 稳定性试验
• 2.3.4 重复性试验
• 2.3.5 加样回收实验
• 2.3.6 不同提取条件提取白藜芦醇试验
• 3 结果与分析
• 3.1 白藜芦醇的HPLC标准曲线
• 3.2 精密度试验结果
• 3.3 稳定性试验结果
• 3.4 重复性试验结果
• 3.5 加样回收实验结果
• 3.6 溶剂对提取白藜芦醇的影响
• 3.7 不同浓度对提取白藜芦醇的影响
• 3.8 料液比对提取白藜芦醇的影响
• 3.9 提取温度对提取白藜芦醇的影响
• 3.10 提取时间对提取白藜芦醇的影响
• 3.11 正交试验结果
• 4 讨论
• 第三章 桑叶中脱氧野尻霉素含量的测定
• 1 前言
• 2 材料与方法
• 2.1 试验材料
• 2.2 试验试剂
• 2.3 试验仪器
• 2.4 试验方法
• 2.4.1 溶液的制备
• 2.4.2 DNJ的衍生化方法
• 2.4.3 测定方法
• 2.4.4 线形关系的考察
• 2.4.5 精密度试验
• 2.4.6 稳定性试验
• 2.4.7 重现性试验
• 2.4.8 加样回收试验
• 3 结果与分析
• 3.1 线性关系
• 3.2 精密度试验结果
• 3.3 稳定性试验结果
• 3.4 重现性试验结果
• 3.5 加样回收试验结果
• 4 讨论
• 第四章 脱氧野尻霉素的提取工艺研究
• 1 前言
• 2 材料与方法
• 2.1 试验材料
• 2.2 试验试剂
• 2.3 试验仪器
• 2.4 试验方法
• 2.4.1 不同溶剂提取脱氧野尻霉素试验
• 2.4.2 不同浓度乙醇提取脱氧野尻霉素试验
• 2.4.3 不同温度提取脱氧野尻霉素试验
• 2.4.4 不同时间提取脱氧野尻霉素试验
• 2.4.5 不同pH提取脱氧野尻霉素试验
• 2.4.6 不同料液比提取脱氧野尻霉素试验
• 2.5 正交试验
• 3 结果与分析
• 3.1 溶剂对脱氧野尻霉素提取的影响
• 3.2 乙醇浓度对提取脱氧野尻霉素的影响
• 3.3 提取温度对提取脱氧野尻霉素的影响
• 3.4 提取时间对提取脱氧野尻霉素的影响
• 3.5 pH值对提取脱氧野尻霉素的影响
• 3.6 料液比对提取脱氧野尻霉素的影响
• 3.7 正交试验结果
• 4 讨论
• 第五章 脱氧野尻霉素的初步分离
• 1 前言
• 2 材料与方法
• 2.1 试验材料
• 2.2 试验试剂
• 2.4 试验方法
• 2.4.1 大孔树脂柱层析
• 2.4.2 聚酰胺柱层析
• 3 结果与分析
• 3.1 不同型号大孔树脂对DNJ的吸附和解吸情况
• 3.2 静态吸附曲线的绘制
• 3.3 pH值对吸附作用的影响
• 3.4 原液浓度对吸附率的影响
• 3.5 洗脱剂的选择
• 3.6 上样流速的考察
• 3.7 解吸剂的流速的影响
• 3.8 纯度分析
• 4 讨论
• 第六章 D370阳离子对DNJ的纯化工艺研究
• 1 前言
• 2 材料与方法
• 2.1 试验材料
• 2.2 试验试剂
• 2.3 试验仪器
• 2.4 试验方法
• 2.4.1 树脂的预处理
• 2.4.2 静态吸附量的确定
• 2.4.3 上柱条件的选择
• 2.4.4 洗脱条件的选择
• 2.4.5 经过阳离子子交换树脂精制后DNJ的纯度
• 3 结果与分析
• 3.1 静态吸附量的确定
• 3.2 上柱条件的选择
• 3.3 洗脱条件的选择
• 3.4 DNJ纯度分析
• 4 讨论
• 第七章 结论及创新点
• 1 结论
• 2 创新点
• 参考文献
• 致谢
• 作者简历
• 在读期间发表论文