pGM-CSF/SS基因免疫对雌鼠生长和繁殖的影响及其安全性研究

论文摘要

本研究应用质粒提取、细菌培养、PCR、酶连免疫吸附试验（ELISA）、放射免疫测定（RIA）等技术,利用本实验室现有的以减毒沙门氏菌（CSO22）呈递的pGM-CSF/SS基因疫苗,口服免疫45只5周龄雌鼠,以空菌和PBS作为对照,研究生长抑素对生长和繁殖机能的影响及其生物学安全性。主要包括以下内容:1基因免疫对母鼠的促生长效果在初次免疫后2周、加强免疫后2周和4周,疫苗免疫组母鼠增重同空菌组和PBS对照组的增重相比差异显著（P＜0.05）;空菌组的增重高于PBS对照组,但差异不显著（P＞0.05）。这些结果显示,SS疫苗免疫后对母鼠具有良好的促生长效果。2基因免疫对生长抑素抗体的影响基因疫苗免疫组在初次免疫后2周、加强免疫后2周和4周、母鼠分娩当天,血中抗体水平均显著高于空菌组和PBS对照组（P＜0.05）,特别是在加强免疫第4周,血中抗体水平与对照组比较差异极显著（P＜0.001）,但哺乳3周后,疫苗处理组与对照组差异不显著（P＞0.05）。在SS基因免疫组,抗体水平一开始呈现逐步上升的趋势,到加强免疫后4周出现高峰,但分娩后抗体水平又逐渐下降,到哺乳3周后和对照组差异不显著（p＞0.05）。pGM-CSF/SS基因疫苗免疫可引起较高的体液免疫反应,但抗体持续时间有一定限度。3基因免疫对母鼠繁殖机能的影响基因免疫后,对母鼠的发情周期、窝产仔数、窝重和初生重等繁殖指标进行检测,结果显示基因免疫组的发情周期比同空菌组和PBS对照组显著缩短（P＜0.05）,说明生长抑素疫苗免疫影响母鼠的发情。窝产仔数、窝重和初生重结果显示,疫苗组同空菌组和PBS对照组相比,差异不显著（P＞0.05）,但试验组仔鼠的初生重高于空菌组和PBS对照组。这些结果说明,疫苗免疫可缩短母鼠的发情周期,但对窝产仔数、窝重、初生重没有影响。测定血中雌激素和孕激素水平显示,在分娩当天,基因免疫组雌激素水平显著高于空菌组和PBS对照组（P＜0.05）,而在分娩后3周,各组雌激素都有所下降,但各组差异不显著（P＞0.05）;同样,但产后和哺乳3周时孕激素水平各组差异不显著。这些结果表明,SS疫苗免疫对雌激素分泌有促进作用,但对孕激素分泌无影响。4基因免疫对仔鼠生长发育的影响哺乳期仔鼠增重结果显示,在产后1周和2周,实验组的增重显著高于空菌组和PBS对照组（P＜0.05）,但在哺乳末期,其增重差异不显著（P＞0.05）。哺乳期过后,基因免疫组和空菌组、PBS对照组相比,虽各周增重有所提高,但差异不显著（P＞0.05）;哺乳期后,同其它两组相比,基因免疫组的增重效果不显著（P＞0.05）。仔鼠生后第3、6、9周,基因免疫组同空菌组和PBS对照组相比,抗体水平和生长激素水平有所提高,但差异不显著（P＞0.05）,结果同增重效果相吻合。这些结果说明,SS疫苗对母鼠的泌乳性能有一定改善,但哺乳期后,促生长效应不明显。5基因疫苗的生殖毒性和基因整合研究母鼠窝产仔数、窝重、仔鼠初重、雌雄比例、子代畸形率和死亡率、母鼠和仔鼠的脏器指数结果显示,基因免疫组同空菌组和对照组相比,差异不显著（P＞0.05）。说明SS疫苗不会影响性成熟母鼠的正常生殖及子代的正常生长发育,对后代无致畸、致死的影响;应用PCR和琼脂糖凝胶电泳进行基因随机整合检测,基因免疫组母鼠和仔鼠各组织0.3μg基因组DNA整合质粒远远小于10个拷贝,远远低于基因组自发突变的概率(2×10-6),表明SS疫苗发生整合的可能性很低,构建的pGM-CSF/SS基因疫苗具有较高的生物安全性。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 英文缩略语
• 1 文献综述
• 1.1 生长抑素在促进动物生长方面的作用
• 1.1.1 生长抑素的发现及最初研究
• 1.1.2 生长抑素基因疫苗研究进展
• 1.2 生长抑素在繁殖性能和胚胎发育方面的作用
• 1.2.1 生长抑素的直接作用
• 1.2.2 通过生长激素的间接作用
• 1.2.3 生长抑素基因疫苗免疫对激素分泌和细胞增殖的影响
• 1.3 生长抑素的其它作用
• 1.3.1 细胞增殖的直接抑制作用
• 1.3.2 细胞增殖的间接抑制作用
• 1.3.3 细胞凋亡的促进作用
• 1.3.4 其它
• 1.4 基因疫苗的安全性研究进展
• 1.4.1 基因疫苗简要概述
• 1.4.2 基因疫苗的常见安全性问题与检测方法
• 1.4.3 生长抑素基因疫苗安全性研究进展
• 2 研究目的和意义
• 3 PGM-CSF/SS免疫对雌鼠生长和繁殖的影响研究
• 3.1 前言
• 3.2 材料与方法
• 3.2.1 以减毒沙门氏菌为载体的质粒鉴定和扩大培养
• 3.2.2 动物分组
• 3.2.3 免疫与采血
• 3.2.4 繁殖性能测定
• 3.2.5 小鼠增重检测
• 3.2.6 生长抑素抗体检测
• 3.2.7 激素测定
• 3.2.8 统计学分析
• 3.3 结果与分析
• 3.3.1 重组质粒pGM-CSF/SS的酶切鉴定
• 3.3.2 疫苗的促生长效力
• 3.3.3 各组的繁殖性能比较
• 3.3.4 后代仔鼠的生长发育
• 3.4 讨论
• 3.4.1 关于pGM-CSF/SS基因疫苗对母鼠生长性能的影响
• 3.4.2 关于pGM-CSF/SS基因疫苗对母鼠生殖性能的影响
• 3.4.3 关于pGM-CSF/SS基因疫苗对后代仔鼠生长发育的影响
• 3.5 结论
• 4 生长抑素基因疫苗免疫母鼠的生物安全性研究
• 4.1 前言
• 4.2 材料与方法
• 4.2.1 材料
• 4.2.2 试验方法
• 4.3 结果与分析
• 4.3.1 pGM-CSF/SS基因疫苗对妊娠母鼠的影响
• 4.3.2 pGM-CSF/SS基因疫苗对仔鼠生长发育的影响
• 4.3.3 脏器指数
• 4.3.4 重组质粒pGM-CSF/SS的酶切鉴定
• 4.3.5 PCR敏感度
• 4.3.6 母鼠及仔鼠基因组DNA质量检测
• 4.3.7 母鼠及仔鼠基因整合检测
• 4.4 讨论
• 4.4.1 关于pGM-CSF/SS基因免疫的生殖安全性
• 4.4.2 pGM-CSF/SS基因免疫对脏器指数的影响
• 4.4.3 关于pGM-CSF/SS基因整合的可能性分析
• 4.5 结论
• 5 总结与创新点
• 5.1 总结
• 5.2 创新点
• 参考文献
• 附录
• 7.1 试验主要仪器
• 7.2 试验主要溶液配制
• 7.3 试验主要步骤
• 7.4 pGM-CSF/SS质粒测序结果
• 致谢