黑龙江大豆疫霉根腐病菌分离检测及致病型研究

论文摘要

大豆疫霉根腐病（Soybean Phytophthora Root Rot）是由大豆疫霉根腐病菌（Phytophthora sojae Kaufmann and Gerdemann）侵染大豆引起的，是大豆的毁灭性病害。其特点是土壤传播、分布广、危害重。大豆疫霉根腐病菌已广泛分布于世界大部分大豆生产区。在我国1989年沈崇尧等首次分离到大豆疫霉根腐病菌并证实大豆疫霉根腐病在我国的存在。目前该病害在黑龙江大豆产区发生逐年加重，呈扩大蔓延之势，对大豆生产构成严重威胁。本文研究了黑龙江省P. sojae的分离、ITS分子检测、致病型分布和对主要杀菌剂的敏感性。主要内容及结论如下：1病原菌的分离：在黑龙江省各大豆产区采集238份土壤样品。应用王子迎的从土壤中直接分离P. sojae的方法，从112份土壤样品中分离到P. sojae，阳性土样分离率为47.1%。本研究明确了黑龙江省P. sojae的分布。2ITS分子检测：从土壤中提取DNA，应用P. sojae的ITS序列设计的特异引物PS1/PS2检测土壤中的P. sojae。在42份样品中扩增到与阳性对照大小相同的330bp的特异性条带，阳性率为65.6%。ITS分子检测的阳性率高于从土壤中直接分离大豆疫霉根腐病菌的阳性率。3致病型鉴定：采用下胚轴伤口接种法对112株P. sojae进行致病型鉴定，结果共鉴定出4个主要致病型，即1、3、13和17号，其中1号为优势致病型，此外还有3个新毒力类型，说明黑龙江省P. sojae存在明显的致病性分化。4敏感性测定：采用菌落生长速率法测定P. sojae对四种杀菌剂的敏感性。结果表明：P. sojae对甲霜灵、甲霜灵锰锌、霜脲锰锌和三乙膦酸铝的敏感性高，没有产生抗药性；并确定四种杀菌剂的敏感性基线分别为0.966、3.141、11.343和146.289μg·mL-1。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 第1章 绪论
• 1.1 大豆疫霉根腐病概述
• 1.1.1 病害危害与症状
• 1.1.2 病原菌
• 1.1.3 发病规律
• 1.2 大豆疫霉根腐病菌的分离
• 1.2.1 病组织分离法
• 1.2.2 土壤分离法
• 1.3 PCR 技术在病原菌检测中的应用
• 1.4 大豆疫霉根腐病菌致病性分化
• 1.5 大豆疫霉根腐病菌对杀菌剂抗性研究
• 1.6 本试验的研究内容与技术路线
• 1.6.1 研究内容
• 1.6.2 技术路线
• 第2章 大豆疫霉根腐病菌的分离
• 2.1 材料与方法
• 2.1.1 试验材料
• 2.1.2 大豆疫霉根腐病菌土壤分离
• 2.1.3 培养基的制备
• 2.2 结果与分析
• 2.2.1 土壤中大豆疫霉根腐病菌的分离
• 2.2.2 大豆疫霉根腐病菌的分布
• 2.2.3 不同茬口土壤中大豆疫霉根腐病菌分离结果
• 2.3 讨论
• 第3章 大豆疫霉根腐病菌的 ITS 分子检测
• 3.1 材料与方法
• 3.1.1 试验材料
• 3.1.2 土壤中 DNA 的提取
• 3.1.3 土壤中卵孢子死活的检测
• 3.1.4 PCR 扩增体系及引物
• 3.1.5 电泳检测
• 3.2 结果与分析
• 3.2.1 土壤中大豆疫霉根腐病菌卵孢子死活的检测
• 3.2.2 土壤中大豆疫霉根腐病菌 ITS 检测结果
• 3.2.3 土壤分离与 ITS 分子检测结果比较
• 3.3 讨论
• 第4章 大豆疫霉根腐病菌致病型鉴定
• 4.1 材料与方法
• 4.1.1 试验材料
• 4.1.2 试验方法
• 4.2 结果与分析
• 4.2.1 致病型鉴定
• 4.2.2 致病型分布
• 4.2.3 病原菌对不同抗病基因的毒性
• 4.2.4 不同地点分离物的毒力比较
• 4.3 讨论
• 第5章 大豆疫霉根腐病菌对杀菌剂的敏感性
• 5.1 材料与方法
• 5.1.1 试验材料
• 5.1.2 试验方法
• 5.2 结果与分析
• 5.2.1 大豆疫霉根腐病菌对甲霜灵的敏感性
• 5.2.2 大豆疫霉根腐病菌对甲霜灵锰锌的敏感性
• 5.2.3 大豆疫霉根腐病菌对霜脲锰锌的敏感性
• 5.2.4 大豆疫霉根腐病菌对三乙膦酸铝的敏感性
• 5.2.5 大豆疫霉根腐病菌对杀菌剂的敏感性基线
• 5.3 讨论
• 第6章 结论
• 6.1 土壤中大豆疫霉根腐病菌的分离
• 6.2 大豆疫霉根腐病菌的 ITS 分子检测
• 6.3 大豆疫霉根腐病菌致病型鉴定
• 6.4 大豆疫霉根腐病菌对杀菌剂的抗性
• 参考文献
• 攻读学位期间发表的学术论文
• 致谢