糖尿病肾病相关磷脂代谢研究

论文摘要

本文基于LC/MS联用技术,建立了血浆磷脂的定性分析方法和定量分析方法以及代谢组学的研究方法,基于定性分析和定量分析的基础上对与糖尿病肾病相关的磷脂代谢紊乱进行了全面的研究。从西医mogensen分期到中医辨证分型不同层面阐述了糖尿病肾病和磷脂代谢的相关性,为疾病机理研究和发展新的诊断方法开创了新途径。首先发展了HPLC和ion-trap-MS/MS联用技术用于对同类结构相似化合物快速准确定性分析的方法。建立了稳定的血浆磷脂的正相色谱分离方法。在血浆中共检测到7大类磷脂,他们分别是phosphatidylserine （PS）, phosphatidylethanolamine （PE）, phosphatidylglycerol （PG） , phosphatidylinositol （PI） phosphatidylcholine （PC）, lysophosphatidylcholine （lysoPC） and sphingomyelin （SM）。通过多种磷脂外标模拟样品,考察七大类磷脂的质谱断裂行为,实现了磷脂类别的定性分析。对同一大类下结构相似的磷脂化合物,采用离子阱多级质谱MS/MS进行快速定性鉴定,共鉴定了六十五种磷脂化合物。以HPLC和TOF-MS联用技术为主要分析手段,建立了同时定量多种结构相似化合物的方法。通过对每大类磷脂中一种磷脂化合物用外标法进行准确定量,同类其它结构相似化合物采用计算定量分析的方法,从而实现了对七大类二十多种化合物的定量分析。对定量方法进行了方法学考察,包括日内精密度,日间精密度,回收率,准确度,均达到定量要求。基于定量结果,从西医mogensen分期到中医辨证分型两个层面对临床样本进行研究,通过横断面分析揭示了不同分期磷脂化合物以及磷脂总量的变化规律,并探讨了其生物学意义。将基于多元统计方法的代谢组学研究模式应用到磷脂的分析中,找出生物标志物,揭示了糖尿病肾病和磷脂代谢的相关性,对糖尿病肾病的机理研究以及临床诊断提供可借鉴的思路和方法。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第1章 引言
• 1.1 课题背景
• 1.2 代谢组学研究技术与进展
• 1.2.1 代谢组学简介
• 1.2.2 代谢组学研究层次
• 1.2.3 代谢组学的研究方法
• 1.3 糖尿病肾病简介与发病机理
• 1.3.1 糖尿病肾病简介
• 1.3.2 糖尿病肾病发病机理
• 1.4 糖尿病肾病与磷脂代谢研究
• 1.4.1 磷脂代谢循环
• 1.4.2 糖尿病肾病引起磷脂代谢紊乱机理
• 1.4.3 磷脂的研究进展
• 1.5 本论文的主要内容
• 第2章 磷脂化合物的定性分析
• 2.1 磷脂结构简介
• 2.2 磷脂种类的分析
• 2.2.1 实验部分
• 2.2.2 磷脂标准品的分析
• 2.2.3 血浆样品的磷脂种类分析
• 2.3 磷脂化合物的定性鉴定
• 2.3.1 实验部分
• 2.3.2 多级质谱方法对磷脂标准品的定性分析
• 2.3.3 血浆中磷脂化合物的定性分析
• 2.3.4 讨论
• 2.4 本章小结
• 第3章 基于磷脂定量的糖尿病肾病横断面分析
• 3.1 七种磷脂化合物定量方法的建立
• 3.1.1 实验部分
• 3.1.2 LC/MS 分析
• 3.1.3 方法学考察
• 3.1.4 讨论
• 3.2 血浆中磷脂的定量分析
• 3.2.1 实验部分
• 3.2.2 定量结果
• 3.2.3 讨论
• 3.3 糖尿病肾病相关磷脂代谢的横断面分析
• 3.3.1 单个磷脂横断面分析
• 3.3.2 磷脂总量横断面分析
• 3.3.3 讨论
• 3.4 本章小结
• 第4章 应用于糖尿病肾病的磷脂代谢组学研究
• 4.1 实验部分
• 4.2 全谱PCA 和PLS-DA 分析
• 4.2.1 生物标志物的确认
• 4.2.2 西医Mogensen 分期PCA 和PLS-DA 分析
• 4.2.3 中医辨证分型的PCA 和PLS-DA 分析
• 4.2.4 讨论
• 4.3 本章小结
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果