硬脂酰鱼精蛋白的合成及用作非病毒基因载体的研究

论文摘要

本文研究了硬脂酰鱼精蛋白的合成,并将其作为非病毒基因载体,考察了与质粒DNA的复合性能,复合物的体外基因转染效果。主要内容包括以下三部分:1)通过N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）与硬脂酸形成的活泼酯,在水性反应环境中与鱼精蛋白进行酯交换反应,从而将疏水性的硬脂酰基团偶联到鱼精蛋白上,成功合成了三种硬脂酰鱼精蛋白（stearyl protamine,简称SP）,分别为SP1,SP2,SP3。将SP在HCl中降解后回收硬脂酸,并用酸碱微量滴定的方法测定含量。SP中硬脂酰基团的含量（质量百分比）分别为2.5%、3.0%、5.5%。通过动态光散射（DLS）对SP以及硫酸鱼精蛋白（PS）的研究发现,SP3可以在水中自组装形粒径110nm左右的稳定聚集体,此聚集体的粒径不随SP3浓度的提高而发生变化,说明是一种热力学稳定的自组装聚集体。2)通过工程菌扩增,碱法抽提,获得编码萤火虫荧光素酶的质粒DNA pGL3-control,并以此作为后继实验中采用的DNA材料。凝胶电泳阻滞实验检验SP对DNA的复合能力,结果表明当载体/DNA质量比超过1.0时,DNA均能被三种SP完全包装起来。与未修饰的鱼精蛋白相比,随着SP中硬脂酰基团含量的升高,其对DNA的复合能力略有减弱。对鱼

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 第一章 前言
• 1.1 基因治疗
• 1.2 非病毒基因载体
• 1.2.1 PLL
• 1.2.2 PEI
• 1.2.3 阳离子脂质体
• 1.2.4 壳聚糖
• 1.3 非病毒基因载体的改性策略
• 1.3.1 PEG 化
• 1.3.2 连接靶向分子
• 1.3.3 疏水修饰
• 1.3.4 其他修饰
• 1.4 鱼精蛋白
• 1.5 论文工作提出
• 第二章 硬脂酰鱼精蛋白的合成和表征
• 2.1 引言
• 2.2 材料及方法
• 2.2.1 实验材料
• 2.2.2 硬脂酰鱼精蛋白的合成及表征
• 2.3 结果与讨论
• 2.3.1 硬脂酸—NHS 活泼酯
• 2.3.2 硬脂酰鱼精蛋白
• 2.3.3 硬脂酰鱼精蛋白的修饰度
• 2.3.4 SP3 自组装聚集体
• 2.4 小结
• 第三章 硬脂酰鱼精蛋白与质粒DNA 的复合性能研究
• 3.1 引言
• 3.2 材料及方法
• 3.2.1 实验材料
• 3.2.2 质粒DNA 的制备
• 3.2.3 凝胶电泳阻滞实验
• 3.2.4 载体/ DNA 复合物的粒径检测
• 3.2.5 DNase I 防护实验
• 3.3 结果与讨论
• 3.3.1 硬脂酰鱼精蛋白包装DNA 的能力
• 3.3.2 复合物的粒径及SP3 与DNA 的复合模式
• 3.3.3 硬脂酰鱼精蛋白对DNase I 的防护作用
• 3.4 小结
• 第四章 细胞毒性评估与体外转染试验
• 4.1 引言
• 4.2 材料及方法
• 4.2.1 实验材料
• 4.2.2 MTT 实验
• 4.2.3 体外转染实验以及荧光素酶活性测定
• 4.3 结果与讨论
• 4.3.1 硬脂酰鱼精蛋白的细胞毒性
• 4.3.2 体外转染效果
• 4.4 小结
• 第五章 结论
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间录用、发表和投稿的学术论文目录