论文摘要
背景原发性醛固酮增多症（简称原醛，Primarv Aldosteronism，PA）是最常见的内分泌高血压之一，两种常见临床亚型为醛固酮瘤（Aldosterone ProducingAdenoma，APA）和特发性醛固酮增多症（Idiopathic Hyperaldosteronism，IHA）。原醛主要的病理生理特点是过多醛固酮的自主分泌。APA多采用手术治疗；尽管大多数原醛患者术后血压恢复正常，但仍有33～44％术后持续性高血压。然而，目前过多醛固酮分泌的机制和术后血压恢复不均一的机制仍不清楚。影响高血压醛固酮代谢和血压调控的遗传因素是否与APA过多醛固酮分泌和术后持续高血压相关还仍不清楚。CYP11B2基因编码合成醛固酮的醛固酮合酶；CYP11B1基因则编码合成皮质醇的11-β羟化酶，两基因位置相近，均位于染色体8q24。研究表明两基因座位上的许多DNA多态性位点处于完全连锁不平衡状态（Linkage Disequilibrium，LD），且CYP11B2基因多态性位点（如rs1799998，intron2野生型／转位型和rs4539）与原发性高血压、11-β羟化酶活性降低、醛固酮分泌与代谢失调，心血管风险密切相关。上述研究提示CYP11B2／B1多态性位点可能与原醛临床表型及术后血压相关。在此假设基础上，本研究对6个DNA多态性位点，包括CYP11B2基因的rs1799998（C-344T）、intron2野生型／转位型、rs4539（A2718G）、rs6414和CYP11B1基因的rs6387（G225A）、rs6410（A2803G）进行基因分型和单体型分析，以判断它们对原醛中CYP11B2基因表达、临床表型的影响，并探讨它们在术后持续高血压中的作用。方法1．采用DNeasy Blood&Tissue试剂盒（Qiagen公司）提取93例随访到的APA患者的组织DNA；在公共SNP数据库（http：／／ncbi．nlm．nih．gov／SNP／和http：／／www．hapmap．org/）中选择CYP11B2和CYP11B1基因中频数≥0．05，且文献报道与醛固酮代谢和高血压相关的位点，包括CYP11B2基因的4个多态性位点：rs1799998、intron2野生型／转位型、rs4539和rs6416及CYP11B1基因的2个多态性位点：rs6410和rs6387。采用一对独立的PCR扩增intron2野生型／转位型位点，其余5个位点采用MGB-Taqman探针法进行基因分型。采用Haploview 4．0分析LD和Hardy-Weinberg平衡。2．采用SYBR Green荧光定量RT-PCR法检测69例APA组织和20例正常肾上腺组织（取白手术的肾癌患者）中CYP11B2和CYP11B1基因的表达，2-△△CT法计算APA组织中基因表达量相对正常肾上腺组织的变化。放射性免疫法检测血浆醛固酮的浓度（PAC）和血浆肾素活性（PRA），并用Pearson相关分析它们与基因表达的关系。3．在R statistics program 2．7．0程序包中使用SNPassoc 1．5-3和Haplo．stats 13．8分析CYP11B2和CYP11B1基因型及单体型与CYP11B2基因表达量和血浆醛固酮浓度、收缩压、舒张压等临床表型的关系。4．在R statistics program 2．7．0程序包中使用SNPassoc 1．5-3和Haplo．stats 1．3．8分析CYP11B2和CYP11B1基因型及单体型与原醛术后血压恢复的相关性。结果1．检测了6个基因多态性位点，其中5个位点（包括CYP11B2基因的rs1799998、intron2野生型／转位型、rs4539和CYP11B1基因的rs6387、rs6410）在所有随访到的的APA患者中均获得成功检测，等位基因频数均＞0．2，基因型频数均＞0．01。所有位点基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡（对rs6387，rs6410，rs4539，intron2野生型／转位型，rs1799998：P分别为0．06，0．71，1．0，0．12，0．11）。配对的LD分析表明rs6387与rs6410和rs1799998存在着较强的LD（D′0．95，0．73），rs4593和rs1799998及rs6410和intron 2野生型／转位型之间也有稍强的LD（D′0．52）。2．在69例APA和20例正常肾上腺组织中均检测到CYP11B2 mRNA和CYP11B1mRNA的表达。相对正常肾上腺组织，APA组织中CYP11B2 mRNA表达明显上调，为正常肾上腺组织的3．58倍（p＜0．01）。且APA组织中CYP11B2 mRNA表达与血浆醛固酮水平有明显相关性（r=0．649，p＜0．01），但与血浆肾素活性无关（r=-0．133，p=0．277）。APA组织CYP11B1 mRNA表达降低，是正常肾上腺组织的0．54倍，但两者差异无统计学意义（p=0．089）。APA组织中CYP11B1 mRNA表达与血浆肾素活性无相关性（r=-0．165，p=0．185），与血浆醛固酮水平也无相关性（r=-0．08，p=0．946）。3．单个位点分析中，未发现CYP11B2和CYP11B1基因的多态性位点包括rs1799998、intron2野生型／转位型、rs4539、rs410和rs6387与CYP11B2基因mRNA表达，血浆醛固酮浓度，术前收缩压、舒张压相关（p均＞0．05）。单体型分析中，GlobalScore统计显示：CYP11B2-CYP11B1单体型与CYP11B2mRNA表达量增加相关（global-stat=16．18，df=8，p=0．04），与血浆醛固酮水平也相关（global-stat=20．41，df=8，P=0．009）；但与术前收缩压和舒张压不相关（分别P=0．34，P=0．54）。多元回归分析发现单体型H1和H3与CYP11B2基因mRNA的表达上调相关（经过Bonferroni校正后分别p=0．02；0．03），H6、H10和H16与过多的醛固酮分泌相关（经过Bonferroni校正后分别p=0．015；0．003；p=0．049）；但未见有单体型与术前收缩压和舒张压相关（p均＞0．05）。4．单个位点分析：上述五个位点包括rs1799998、intron2野生型／转位型、rs4539、rs410和rs6387中只有rs4539（AA）与术后持续性高血压相关（经过Bonferroni校正后p=0．01）。单体型分析中：Global Score统计显示CYP11B2-CYP11B1单体型与原醛术后血压恢复相关（Max-Stat sim．p=0．006）；多元回归分析中发现单体型H1和H3是预测术后持续性高血压的遗传性危险因子（经过Bonferroni校正后，分别p=0．02；0．03）。另外，传统因素包括高血压持续时间长，有高血压家族史和术前较高的收缩压是术后恢复不好的传统风险因素（经过Bonferroni校正后，分别p=0．002，=0．0015，＜0．00005）。结论1．对随访到的93位APA患者获得了较为完善的CYP11B2和CYP11B1基因多态性的遗传学资料，为后续证实CYP11B2／B1基因多态性和临床表型关系的研究提供了基础。2．APA患者血浆醛固酮的过多分泌可能与CYP11B2基因的表达上调有关，而后者可能与APA组织中出现CYP11B1基因的表达相关。3．尽管作用较弱，本研究显示APA患者CYP11B2和CYP11B1基因多态性可能通过上调CYP11B2的表达，导致血浆醛固酮水平的升高。4．尽管作用较弱，本研究显示APA患者术后血压可能受到CYP11B2／CYP11B1基因多态性的影响。提示遗传因素在APA患者术后血压恢复不均一的机制中可能起一定的作用，单体型H1和H3可能成为预测术后持续性高血压的遗传指标。
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相关论文文献
- [1].CYP11B2/B1基因多态性与醛固酮瘤术后持续性高血压的相关性研究[J]. 临床泌尿外科杂志 2009(03)
标签：基因论文; 多态性论文; 原发性醛固酮增多症论文; 高血压论文;