论文摘要
目的:体外分离培养骨髓间充质干细胞（BMSCs）并观察其生物学特性;模拟人后路髓核摘除术进行后外侧穿刺抽吸髓核建立椎间盘退变动物模型的可行性研究;观察移植BMSCs能否在退变的椎间盘内存活和增殖,及其是否能延缓椎间盘的退变和促进退变椎间盘的修复实验研究。方法:①.采用密度梯度离心法加贴壁培养法对兔BMSCs进行了分离纯化,流式细胞仪器（FCM）分析BMSCs表面标志,用含有转化生长因子-β1（TGF-β1）的无血清诱导培养基培养2周后,行HE、II型胶原免疫组化检查是否BMSCs向软骨细胞定向分化。②.模拟人后路髓核摘除术进行后外侧穿刺抽吸髓核建立椎间盘退变动物模型,于术后2、4和8周分别行X线、MRI影像学和HE染色病理观察椎间盘退变的情况。③.将带有BrdU标记的BMSCs移植于退变2周后动物模型中,于术后2周、4周、8周和12周随机取8只兔子行影像学（X线及MRI）后,再行HE和BrdU免疫组化病理学检查,观察实验组与对照组的变化。结果:①.骨髓MSCs体外分离培养,其增殖迅速,短时间内可大量扩增达到组织工程需要的种子细胞数量要求;FCM检测BMSCs的表面抗原CD44阳性,CD45阴性;且细胞保持未分化状态,经诱导后可向成软骨细胞方向分化。②.通过X线、MRI及HE病理学证明成功建立后外侧穿刺抽吸髓核制作椎间盘退变动物模型;③.在移植术后各时间点均可观察到BrdU免疫组织化学染色阳性细胞的存在。④.骨髓MSCs移植可以有效抑制椎间隙狭窄及椎间盘水分丢失;在移植术后12周时,MSCs移植组平均DHI为81.66±2.05%,PBS对照组平均DHI为61.01±3.57%。组织学染色结果显示,MSCs能够在退变椎间盘内存活和增殖,并能够保持椎间盘的结构。术后4、8、12周病理分级实验组与对照组相比具有显著意义（P<0.05）。在整个实验过程中,各组椎间盘髓核和中、内层纤维环中均未观察到血管增生、炎性细胞浸润及骨赘形成。结论:①.纤维环后外侧穿刺髓核抽吸法能诱导椎间盘退变;②.移植于后外侧穿刺抽吸髓核的退变椎间盘内的骨髓MSCs能够存活,并且有增殖能力,其可以延缓退变椎间盘进一步退变及能促进退变椎间盘修复,在椎间盘退变疾患细胞移植治疗中,骨髓MSCs可以作为椎间盘组织工程的理想种子细胞。
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