论文摘要
目的:尿激酶型纤溶酶原激活剂（urokinase type plasminogen activator,uPA）在恶性肿瘤细胞的侵袭转移及血管生长中发挥重要作用,尿型纤溶酶原激活剂受体（uPAR）和表皮生长因子受体（EGFR）在恶性肿瘤细胞中普遍表达,与恶性肿瘤细胞的增殖和浸润密切相关。因此,uPA/uPAR及EGFR已经成为恶性肿瘤治疗的新靶点。本实验构建了由表皮生长因子（EGF）、uPA活性结构域氨基酸末端片段（Amino-Terminal Fragment,ATF）和IgG恒定区Fc段串联而成的双功能融合蛋白（ATF-EGF-Fc）,并评价了其在体内外实验中抑制肿瘤活性的作用。方法:1观察ATF-EGF-Fc融合蛋白对HUVEC（人脐静脉内皮细胞）增殖的影响作用。2观察ATF-EGF-Fc融合蛋白对HUVEC（人脐静脉内皮细胞）迁徙的影响作用。3观察ATF-EGF-Fc融合蛋白对肿瘤擦伤试验的影响。4观察ATF-EGF-Fc融合蛋白对鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）血管形成的影响。5检测ATF-EGF-Fc融合蛋白对体外培养肿瘤细胞的细胞毒作用。6在裸鼠荷瘤实验中观察ATF-EGF-Fc融合蛋白在体内抑制肿瘤的疗效。结果:1 MTT比色法结果显示,在100-400nM浓度范围内,HUVEC细胞增殖抑制率随着ATF-EGF-Fc融合蛋白浓度的增加而上升,ATF-EGF-Fc能明显抑制HUVEC细胞的增值,并且呈剂量依赖关系。2与对照组相比,ATF-EGF-Fc、ATF-Fc能抑制uPA诱导的HUVEC细胞迁移。3与对照组相比,细胞培养基中加入ATF-EGF-Fc融合蛋白48小时后肿瘤细胞的增殖明显受到抑制,擦痕两侧细胞密度相对较低。4对比对照组,加入ATF-EGF-Fc能显著抑制鸡胚绒毛膜血管的生成,其抑制血管生成作用效果优于ATF-Fc和Herceptin组。5结晶紫染色法观察ATF-EGF-Fc融合蛋白对MCF-7细胞的细胞毒作用,比较对照组,ATF-EGF-Fc具有明显的抑制MCF-7细胞作用,与药物浓度增加成正相关。6在裸鼠肝癌模型实验中,ATF-EGF-Fc处理组中瘤块重量最轻,其次为ATF-Fc组。ATF-EGF-Fc给药组抑瘤率达到了74.7%,与对照组比较,统计学有差异。结论:1 ATF-EGF-Fc融合蛋白可显著抑制人乳腺癌细胞（MCF-7）及肝癌细胞（HepG2）的增殖,对MCF-7及HepG2具有显著抑制作用。2在裸鼠肝癌荷瘤实验中,与对照组相比,ATF-EGF-Fc显著抑制肝癌细胞生长。ATF-EGF-Fc双功能融合蛋白具有抑制人肝癌细胞活性作用,从而为开发生产可用于临床治疗肝细胞癌患者的多功能融合蛋白奠定了基础。
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