Aβ对大鼠海马神经元损伤及UCP2表达意义的初步研究

论文摘要

目的:研究Aβ对体外培养大鼠海马神经元的毒性作用,及UCP2在Aβ诱导海马神经元损伤中的可能作用。阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease, AD）是一种以损害大脑记忆和认知功能为主的中枢神经系统变性疾病,发病机制目前还不是很清楚。现有大量实验结果和临床资料表明Aβ是各种病因诱发AD的共同通路,是AD形成和发展的关键因素,而自由基损伤是Aβ的主要毒性机制。自由基氧化应激增强会导致脂质、蛋白质和DNA的损伤,而且因为高的代谢率、低水平的抗氧化剂、再生能力差等多种原因神经元很容易受到自由基的影响。解偶联蛋白2（uncoupling protein 2, UCP2）是线粒体内膜解偶联蛋白家族成员,广泛分布于人类及啮齿类动物的多种器官。目前,UCP2的生理功能尚不十分清楚,较多研究表明,UCP2可通过“质子漏”及氧化磷酸化解偶联作用,降低ROS产生,对细胞形态、功能起到保护作用。因此,我们推测UCP2可能通过其降低ROS的功能,对Aβ诱导大鼠海马神经元损伤有保护作用。方法:选用出生24小时内的SD大鼠,无菌分离并培养海马神经元,倒置显微镜进行形态学观察,培养至9-10天,经冷丙酮固定后,尼氏染色鉴定神经元。将终浓度分别为5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L Aβ1-40加入到培养9天的海马神经元中,共同孵育24小时。观察Aβ1-40对海马神经元的毒性作用,台盘兰染色法鉴定神经元的存活率,检测细胞上清液中乳酸脱氢酶和一氧化氮含量的变化。免疫细胞化学法观察UCP2的定位与表达变化。结果:1.原代培养大鼠海马神经元,倒置显微镜进行形态学观察,尼氏染色鉴定神经元,细胞胞浆内蓝紫色颗粒及明显的空泡状核,为神经元所特有,占细胞总数90%以上。细胞的数量与状态可用于本研究。2.不同浓度Aβ1-40损伤海马神经元后,台盘兰染色结果显示10μmol/L和20μmol/L Aβ1-40损伤组与其它组相比有显著性差异,细胞存活率明显下降（n=3, P<0.001）;20μmol/L Aβ1-40损伤组细胞上清液中LDH明显增加,与其他组相比有显著性差异（n=4, P<0.05）。3. 20μmol/L Aβ1-40损伤组细胞上清液中NO明显增加,与其它组相比有显著性差异（n=4, P<0.05）。4.免疫细胞化学结果显示UCP2在海马神经元胞浆中有表达。5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L Aβ1-40损伤海马神经元后,神经元胞浆内出现棕黄色UCP2阳性染色颗粒,其中20μmol/L Aβ1-40损伤组阳性颗粒尤其丰富,平均相对光密度与其他组相比有显著性差异（P<0.05）。5. Aβ1-40损伤海马神经元后,将NO与LDH、UCP2与NO做相关性分析,结果表明:在Aβ1-40终浓度小于20μmol/L时,NO与LDH之间存在显著正相关（n=4, P< 0.001, r=0.864）,UCP2与NO之间存在显著正相关（n=4, P< 0.001, r=0.799）。结论:1.Aβ1-40对海马神经元有损伤作用,自由基的产生增加可能是其损伤途径之一。2.在Aβ1-40致海马神经元损伤中,UCP2可能通过降低活性氧的产生对海马神经元起保护作用。

论文目录

• 一、正文
• （一） 中文摘要
• （二） 英文摘要
• （三） 前言
• （四） 材料与方法
• （五） 结果
• （六） 讨论
• （七） 结论
• （八） 参考文献
• 二、文献综述
• （一） 综述
• （二） 参考文献
• 三、致谢