SLE患者B淋巴细胞表观遗传调控研究

论文摘要

目的:通过对外周血中B细胞整体基因组的甲基化状态以及甲基化相关调控基因、组蛋白修饰相关基因表达进行研究,试图找出B细胞的表观遗传学改变与SLE的关联,为SLE的发病机理与治疗提供新的思路。方法:（1）密度梯度离心分离正常人、病人的外周血单个核细胞,磁珠分离B细胞（2）试剂盒（Qiagen RNA/DNA mini kit,TIANamp Genomic DNAkit）提取总RNA、基因组DNA（3）试剂盒(MethylampTMGlobal DNA MethylationQuantification Kit)检测B细胞整体基因组甲基化水平（4）实时定量聚合酶链反应（quantitative real-time PCR）检测甲基化相关基因mRNA的表达,包括以下基因:DNMT1、DNMT3a、DNMT3b、MBD1、MBD2、MBD3、MBD4、MECP-2,以及组蛋白修饰相关基因SIRT1、SUV39H2、CREBBP的mRNA表达结果:（1）SLE患者B细胞整体基因组甲基化水平与正常人比较无显著性差异（P=0.574）。（2）SLE患者B细胞中DNMT1、DNMT3a、DNMT3b、MBD1、MBD2、MBD3、MBD4、MECP-2的mRNA的表达与正常人比较无显著性差异（P均＞0.05）。（3）与正常对照组相比,SLE患者组B细胞SUV39H2 mRNA表达水平显著降低（P=0.01）,SIRT1、CREBBP的mRNA表达在SLE患者组与正常对照组之间无显著性差异（P均＞0.05）。结论:SLE的自身免疫可能与B细胞DNA甲基化无关,是否与B细胞组蛋白修饰有关还需进一步的研究。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 第一章 前言
• 第二章 材料与方法
• 2.1 仪器与设备与试剂
• 2.1.1 主要仪器设备
• 2.1.2 主要试剂
• 2.1.3 常用试剂配置
• 2.2 研究对象
• 2.3 实验步骤
• 2.3.1 PBMC分离
• 2.3.2 磁珠分离B细胞
• 2.3.3 试剂盒提取 RNA、DNA
• 2.3.4 整体甲基化定量试剂盒测定整体基因组的甲基化水平
• 2.3.5 实时荧光定量PCR测定相关基因的mRNA表达
• 2.4 统计学分析
• 第三章 结果
• 3.1 B细胞整体基因组甲基化水平测定
• 3.2 待测基因的mRNA表达水平
• 第四章 讨论
• 第五章 结论
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 致谢