论文摘要
目的了解体外培养的神经干细胞端粒酶活性,观察培养至不同时间神经干细 胞端粒酶活性、端粒长度和细胞增殖速率的情况,并探讨神经干细胞分化 后端粒酶活性的变化,为神经干细胞的研究和进一步应用提供理论和实 验依据。方法1. 用无血清培养法从新生大鼠脑皮质分离培养神经干细胞,用免疫荧光细 胞染色鉴定神经干细胞。2. 用TRAP（Telomeric Repeat Amplification Protocol）-ELISA法分别测定神经 干细胞、HEK-293 细胞（阳性对照）和WI-38 细胞（阴性对照）的端粒 酶活性,并测定培养至4-12 周不同时间时神经干细胞的端粒酶活性, 用细胞计数法测定培养至4-12 周不同时间时神经干细胞的增殖速率。3. 用Southern-blot 的方法分别测定培养第1 代、第10 代时神经干细胞、 HEK-293 细胞（阳性对照）和WI-38 细胞（阴性对照）的端粒长度。4. 用含1%胎牛血清+2%B27 的DMEM/F12 诱导神经干细胞分化;用 TRAP-ELISA 法测定分化后细胞端粒酶活性;并用RT-PCR 法和 Western-blot 法进一步检测分化前后端粒酶逆转录酶（TERT）的表达情 况。结果1. 新生大鼠脑皮质分离培养出表达巢蛋白（Nestin）抗原,具有自我更新能力 和多向分化潜能的神经干细胞。2. 体外培养4-12 周内不同时间的神经干细胞均具有端粒酶活性,且其端 粒酶活性不会随培养时间而变化,细胞增殖速率也没有明显的差异。
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