泡沫细胞模型的建立及PPARs参与动脉粥样硬化机制的研究

论文摘要

目的建立THP1巨噬细胞源性泡沫细胞的体外模型;观察THP1细胞目的基因的表达及PPARs激动剂对THP1巨噬细胞脂质代谢的影响,并探讨其家族中各亚型参与AS发生发展的机制。方法1.体外培养的THP1悬浮细胞以5ng/ml的PMA诱导24小时,镜下观察细胞贴壁情况并收集贴壁细胞,分离高脂血症患者血清,添加至THP1细胞培养基中（使之含10%血清）,继续孵育12小时,固定后经油红O染色,镜下观察胞内脂质染色情况。2.HUT78细胞与THP1细胞单独培养或共培养,经PMA诱导和/或苯扎贝特孵育,每组6个复孔,24小时后收集各孔细胞,MTT比色法检测吸光度值（OD值）,观察两种细胞增殖情况。3.THP1细胞经5ng/mlPMA诱导24小时,分别加入0.1、1、10、50μmol/L苯扎贝特继续孵育12小时,并与单纯THP1细胞、THP1+PMA及THP1+10μmol/L苯扎贝特组比较;分别提取总RNA,采用半定量 rt-PCR 方法测定 PPARα、PPARβ、PPARγ、ANGPTL3、ANGPTL4、ABCA1、ABCG1、LPL mRNA的表达情况,观察不同剂量苯扎贝特对PPARs激动作用和PPARs各亚型对脂质代谢的影响。结果1.经5ng/mlPMA诱导24小时后,镜下可见THP1细胞已转化为经典的巨噬细胞。油红O染色发现,与10%高脂血症人血清共孵育12小时后,培养细胞中出现了大量的红染颗粒。2.HUT78与THP1细胞多种孵育组合结果显示,二者共培养较单纯HUT78细胞组OD值增高（P<0.05）,THP1经PMA诱导后较未诱导组生长受到抑制,THP1添加苯扎贝特后较未加药组生长受到抑制,两种细胞共培养经PMA诱导后较未诱导组生长受到抑制,差异均有统计学意义（P<0.05）,HUT78加苯扎贝特与未加药组无统计学差异（P>0.05）。3.THP1巨噬细胞PPARs mRNA的表达,随苯扎贝特浓度的增加,PPARα mRNA的表达呈先增高后降低的趋势,以10μmol/L时其表达最高,PPARβ及PPARγmRNA的表达逐渐增高,以50μmol/L时其表达最高,与其他组相比差异有统计学意义（P<0.05）;ANGPTL3、ANGPTL4 mRNA的表达随药物浓度的增加亦逐渐增高,50μmol/L时ANGPTL3表达最高,10μmol/L时ANGPTL4表达最高,与其他组相比差异有统计学意义（P<0.05）;ABCA1、ABCG1 mRNA的表达随药物浓度呈逐渐增高趋势,均在50μmol/L时表达最高,与其他组相比差异有统计学意义（P<0.05）。4.Spearman相关分析显示,PPARα、PPARβ、PPARγ三者与ABCA1、ABCG1mRNA 表达均呈正相关（P<0.05）;PPARββ、PPARγ 均与 ANGPTL3、LPL呈正相关（P<0.05）;ANGPTL3与LPL呈正相关（P<0.05）。结论1.经PMA诱导及高脂人血清孵育成功建立THP1巨噬细胞源性泡沫细胞模型,为体外研究AS机制提供新途径。2.THP1细胞经PMA诱导后具有巨噬细胞特性,自身不再增殖且不再刺激T细胞（HUT78）增殖;苯扎贝特抑制THP1细胞生长。3.苯扎贝特可激动PPARs全部亚型,且呈浓度依赖性;苯扎贝特呈浓度依赖性上调 ANGPTL3、ANGPTL4、ABCA1、ABCG1 及 LPL mRNA 的表达,且与PPARs通路的活化有关。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 缩略语/符号说明
• 前言
• 研究现状、成果
• 研究目的、方法
• 对象和方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 结论
• 发表论文
• 综述 PPARs参与动脉粥样硬化过程的机制
• 综述参考文献
• 致谢