论文摘要
【目的】本实验通过综合运用体外细胞培养技术、流式细胞仪技术及相关生化指标检测等多种方法研究银杏叶提取物在高碘所致血管内皮细胞损伤中所起到的保护作用。观察不同浓度的银杏叶提取物对不同浓度的碘所致损伤的防治作用，从侧面研究高碘所致损伤的作用机理，丰富银杏叶提取物药物作用的实验研究。【材料与方法】1、细胞培养：以含有10％胎牛血清的RPMI 1640培养基常规培养ECV304内皮细胞株，传代待细胞生长状态稳定后进行各项实验。2、细胞计数及形态学观察：制备单细胞悬液调整细胞密度为0.8～1.0×105／ml，种24孔板，待细胞贴壁后加入不同浓度的碘化钾溶液（0～6000μg／L）及不同浓度的舒血宁注射液（0～10μl／ml），每板均设空白对照组，于4、8、12、24小时时观察细胞生长状况。3、MTT检测：在不同浓度药物处理后的96孔细胞培养板中每孔添加MTT试剂20μl（5mg／ml），37℃孵育4h、8h、12h、24h后终止培养，小心弃去培养液，每孔加入150μl二甲基亚砜（DMSO）溶解，振荡10min。用酶标分析仪在490nm波长下测其光吸收值（0D），可间接反映细胞数量。4、流式细胞仪技术：待测细胞经离心—PBS冲洗—吹匀—固定—再离心—冲洗—吹打—染色（4℃，20-30分钟）后，400目尼龙网过滤后上机检测。ModFit分析软件分析，用细胞S期比率（SPR）表示相对增殖力。SPR=S／（G0／G1+S+G2／M）。5、细胞代谢功能检测：利用试剂盒对培养细胞的上清液中超氧化物歧化酶（SOD）活性进行检测。【结果】1、细胞计数及细胞增殖活性：舒血宁空白组在一定浓度范围内高碘可促进细胞增殖，如4h时碘浓度≥3000μg／L剂量组、12h时700-3000μg／L剂量组；作用时间延长或者浓度增加时可抑制细胞增殖，如12h时≥14000μg／L剂量组、24h时≥3000μg／L剂量组。在中高浓度舒血宁实验组细胞增殖活性对碘浓度的变化较为缓和，出现促增殖现象的碘浓度较高，在12h时≥4000μg／L剂量组及24h时3000-5000μg／L剂量组仍可促进细胞增殖。2、流式细胞术：碘及舒血宁作用12小时后，对照组的细胞S期比率（SPR）（9.19±2.13）％低于3000μg／L组（10.75±1.96）％而高于5000μg／L组（5.03±1.21）％，P＜0.05；3000μg／L组中各组G0／G1、SPR、G2-M等指标无明显差别，但其凋亡率随舒血宁浓度的增加而明显降低，5000μg／L各实验组G0／G1比率与凋亡率随舒血宁浓度的增加明显降低，而SPR、G2／M比率随舒血宁浓度的增加明显升高。3、一定浓度高碘作用一定时间后，SOD含量随碘浓度的升高而升高，当达到最高值后随碘浓度的升高而降低，同一时间段出现最高值的碘浓度随舒血宁浓度增高而增加。【结论】1、一定浓度的高碘对体外培养的内皮细胞有损伤作用，不同浓度的舒血宁可以对抗不同浓度高碘所致的损伤作用。2、高碘对内皮细胞的损伤作用可能与自由基产生较多导致氧化损伤有关，而舒血宁可通过增强还原性对抗其损伤作用，但是其具体作用途径及作用机理还有待于进一步研究。