遗传性易栓症的基础与临床研究

论文摘要

背景近年来,血栓性疾病如缺血性心脑血管病、静脉血栓栓塞症(Venous thromboembolism,VTE)等在年轻患者中的发病率逐年升高。研究表明,血栓的发生除了与获得性危险因素如手术、骨折、肿瘤等有关外,遗传性抗凝蛋白缺陷如蛋白C (PC)、蛋白S(PS)或抗凝血酶(AT)缺陷等与血栓形成具有密切的关系。FV Leiden导致的血浆活化蛋白C抵抗(APCR)和凝血酶原G20210A突变已被证实是西方人群血栓性疾病最为相关的危险因素。然而,我国APCR的发病率并不像国外那样高,且FV Leiden和凝血酶原G20210A突变罕见。为了进一步研究国内血栓性疾病发生的病因及高危因素,探讨抗凝蛋白缺陷在其发生中的作用,我们对85例“原因不明”(即排除可能存在的获得性因素)的血栓性疾病患者和50例健康对照者的蛋白C(PC)、蛋白S(PS)、抗凝血酶(AT)活性水平进行了检测和分析。遗传性蛋白C (protein C, PC)缺陷症是VTE的主要遗传性危险因素之一,特点主要表现为自幼反复发生动静脉血栓,属常染色体显性遗传病,多数伴有血栓家族史。迄今我国尚缺乏PC缺陷症的大规模人群调查研究,仅有个案报道。本研究发现一个遗传性PC缺陷症家系,通过分子生物学研究发现了新的PC基因杂合错义突变和杂合缺失突变。目的1.探讨蛋白C(PC)、蛋白S(PS)、和抗凝血酶(AT)活性水平在中国人“原因不明”血栓性疾病患者中的发生情况并评价其引起血栓的危险性。2.对一例静脉血栓患者进行临床诊断、家系调查及表型研究,并对该遗传性PC缺陷症患者及家系成员的PC基因进行测序分析,分析遗传规律,对其分子发病机制进行初步研究。方法PC活性(PC:A)、蛋白S活性(PS:A)和抗凝血酶活性(AT:A)采用发色底物法测定;PC抗原(PC:Ag)采用ELISA法检测。检测85例血栓性疾病患者与50例正常健康对照者血浆PC、PS、AT活性水平并作比较分析。所有实验结果以均数±标准差(χ±s)表示,组间样本资料采用t检验;危险度采用多变量logistic回归分析;P<0.05具有统计学差异。对一例先证者及家系成员PC基因的9个外显子序列PCR扩增,PCR产物回收、纯化后进行测序,用Chromas软件将测序结果与美国NCBI基因库所公布的序列进行比较(Blaster),寻找基因突变。结果1)85例血栓性疾病患者中位年龄43岁(17~69岁),其中≤45岁60例(70.6%),>45~50岁20例(23.5%),50岁以上5例(5.9%);男性50例,女性35例,男女比例为1.4:1。动脉血栓组18例(男性10例,女性8例),中位年龄40岁;静脉血栓组67例(男性40例,女性27例),中位年龄45岁。抗凝蛋白活性水平比较发现:动脉血栓组和静脉血栓组PC、PS、AT活性均明显低于正常对照组(P<0.001);再发组PC、PS、AT平均活性低于初发组(P<0.01);年龄≤45岁组患者PC、PS、AT平均活性低于45岁以上组(P<0.01)。动脉血栓组PC、PS、AT平均活性稍高于静脉血栓组,血栓复发组抗凝蛋白平均活性稍高于多发组,但不具有统计学意义(P>0.05, P>0.05)。共有26例患者存在抗凝蛋白缺陷(占30.6%):PC缺陷7例(8.2%),PS缺陷9例(10.6%),AT缺陷5例(5.9%),复合缺陷5例(PS合并AT缺乏4例,PC合并AT缺乏1例)(5.9%)。抗凝蛋白缺陷组血栓发生的相对危险性明显增加(OR=10.67,95%CI为4.23~27.56)。其中PS缺陷发生血栓的危险度最高。2)先证者PC:Ag和PC:A分别为1.4和34%,表现为I型PC缺陷症;其姐姐及其儿子PC:A分别为52%和53%,其女儿PC:A为84%(正常范围70~130%)。基因分析发现PC基因第9外显子区G12622T杂合错义突变,导致Val (GTG) 274 Leu (TTG);同时发现第9外显子区存在13010 ~ 13012或13013 ~ 13015位TCC ( L404)杂合缺失。先证者儿子也存在上述2种突变。家系成员(I 2、II 1、II 2)在第1外显子及侧翼区第2 405位、2 583位分别存在G/C、A/T多态性。结论1)抗凝蛋白缺陷是中国血栓患者最常见的遗传性易患因素。中国人“原因不明”的血栓性疾病患者普遍存在抗凝蛋白水平低下,抗凝蛋白缺陷不仅与血栓性疾病的发生有关,而且与血栓复发密切相关。2)该家系为I型遗传性PC缺陷症。PC基因第9外显子G12622T杂合错义突变,及13010 ~ 13012或13013 ~ 13015位TCC杂合缺失,导致蛋白质合成过程中第274位Val被Leu替代,以及第404位Leu缺失。上述2种突变是目前尚未报道的新的基因突变。

论文目录

• 英文缩略词表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 第一部分 “原因不明”血栓性疾病患者抗凝蛋白检测及临床意义
• 1 前言
• 2 材料方法
• 2.1 病例来源
• 2.2 仪器与试剂
• 2.3 实验方法
• 3 实验结果
• 4 讨论
• 第二部分 I型遗传性蛋白C缺陷症遗传表型和基因突变的研究
• 1 前言
• 2 材料方法
• 2.1 病例及家系资料
• 2.2 仪器与试剂
• 2.3 实验方法
• 3 实验结果
• 4 讨论
• 结论
• 参考文献
• 个人简历
• 致谢
• 综述 遗传性易栓症与不良妊娠
• 参考文献