骨髓间充质干细胞移植对血管性痴呆模型大鼠脑源性神经生长因子的影响

论文摘要

第一部分大鼠骨髓间充质干细胞的分离、培养和鉴定【目的】探讨大鼠骨髓间充质干细胞（Mesenchymal stem cells, MSCs）的体外分离、纯化、传代、鉴定,为进行细胞移植提供功能稳定的种子细胞。【方法】无菌条件下取幼年SD大鼠的股骨,采用全骨髓培养结合细胞贴壁法分离纯化MSCs。待细胞生长铺满塑料瓶底80%-90%左右时,用0.25%胰蛋白酶控制消化30-60S后进行传代。倒置相差显微镜下观察原代及传代后的细胞的形态。通过向骨细胞分化诱导方法对扩增后的MSCs进行鉴定。【结果】大鼠MSCs在体外可以分离培养扩增,分离培养的MSCs形态呈长梭形,为贴壁生长的成纤维样细胞,传代后的细胞形态趋于均一。经诱导MSCs能分化为成骨细胞,茜素红S可见钙结节阳性。【结论】全骨髓培养结合细胞贴壁法可以成功的建立大鼠MSCs体外分离和培养体系,且培养的MSCs纯度高,活力强,性状稳定。MSCs具有多向分化潜能,可通过诱导向成骨细胞分化。第二部分血管性痴呆大鼠模型的制备【目的】探讨制备理想的血管性痴呆（Vascular dementia,VD）动物模型方法。【方法】采用间隔7天先后结扎双侧的颈总动脉的方法制备VD大鼠模型,利用Morris水迷宫检测不同时段各组大鼠空间学习记忆能力。【结果】术后30天,大鼠的成活率高达82%。行为学检测结果表明,与假手术组相比,血管性痴呆大鼠有明显的学习记忆障碍。【结论】改良后的2-VO的VD模型具有成功率高,重复性好,痴呆症状稳定等优点,是建立VD的理想模型,可以作为血管性痴呆模型用于基础实验研究。第三部分大鼠骨髓间充质干细胞移植对血管性疾呆大鼠模型的疗效观察及BDNF检测【目的】观察静脉注射骨髓间质干细胞（Mesenchymal stem cells,MSCs）对血管性痴呆（Vascular dementia,VD）大鼠脑组织脑源性神经营养因子（Brain-derived neurotrophic factor ,BDNF）表达的影响。【方法】将5-溴-2’-脱氧尿苷（Brdu）标记后的骨髓MSCs通过静脉植入VD大鼠,4周后,利用水迷宫试验、酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA）方法检测VD大鼠认知功能以及脑组织BDNF含量变化。【结果】相对于模型组,MSCs移植组大鼠的定位航行试验（F=47.61,P<0.01）和空间探索试验（P<0.01）差异有统计学意义;海马、额叶皮质、脑脊液中的BDNF含量都有提高（0.524±0.382,0.879±0.410;0.150±s0.131,0.333±0.192;0.160±0.141,0.268±0.142）。【结论】MSCs移植后VD大鼠空间学习记忆能力得到改善,而且这种改善可能与增加的BDNF含量有关。

论文目录

• 英文缩写表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一部分 大鼠骨髓间充质干细胞的分离、培养和鉴定
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 2 结果
• 2.1 MSCs的原代和传代培养
• 2.2 生长曲线的绘制
• 2.3 MSCs 向成骨细胞分化的诱导
• 3 讨论
• 第二部分 血管性痴呆大鼠模型的制备
• 1 材料和方法
• 1.1 主要仪器设备
• 1.2 M o r r i s 水迷宫行为学检测
• 1.3 实验动物及分组
• 1.4 VD 模型的制作
• 1.5 统计学方法
• 2 结果
• 2.1 实验动物一般情况
• 2.2 VD 模型行为学检测结果
• 3 讨论
• 第三部分 大鼠骨髓间充质干细胞移植 对血管性痴呆大鼠模型的疗效观察及 BDNF 检测
• 1 材料
• 1.1 实验动物分组及处理
• 1.2 主要仪器和试剂
• 2 方法
• 2.1 MSCs 的标记和计数
• 2.2 行为学检测
• 2.3 脑脊液的采集
• 2.4 海马和额叶皮质组织匀浆制备
• 2.5 ELISA 法测定 BDNF 浓度
• 2.6 统计学分析
• 3 结果
• 3.1 MSCs移植对VD大鼠学习记忆的影响
• 3.2 B D N F 标准曲线的制作
• 3.3 BDNF 的含量变化
• 4 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述
• 致谢