丹参素对B16F10黑色素瘤恶性生物行为的影响

论文摘要

背景国外有关肿瘤高凝学说的提出,使得活血化瘀药对肿瘤治疗的研究引起了人们的高度重视,而目前关于活血化瘀药物对肿瘤治疗是否取得良好的作用,还存在争议。丹参是最常用的活血化瘀中药之一,近年来关于丹参对肿瘤的治疗作用广受关注,其实验结果也存在着很大的分歧。丹参素[D-（+）-β-（3,4-dihydoxy-phenylalanine）;DSS]是丹参中的主要活性成分之一,不仅具有抗血栓、抗动脉粥样硬化的药效,而且还有抗氧化、抗炎、清除自由基、增强免疫等多种与肿瘤微环境学说相关的药理活性。本课题从体内外研究丹参素对肿瘤恶性生物行为的影响及其作用机制,为阐明丹参对肿瘤的作用提供实验依据,同时为临床应用提供理论依据。目的研究丹参素体内外对肿瘤恶性生物行为的影响及其作用机制。方法体外通过MTS/PMS比色法观察丹参素对B16F10黑色素瘤细胞增殖的影响;采用Boyden趋化小室法观察丹参素对B16F10细胞侵袭和迁移能力的影响;采用蛋白免疫印迹（Western blot）技术检测丹参素对B16F10黑色素瘤细胞中VEGF、MMP-2、MMP-9表达的影响。分别采用MTS/PMS比色法、Boyden趋化小室法、HUVEC小管形成实验观察丹参素对VEGF所诱导的HUVEC增值、迁移和管腔结构形成的影响。体内通过足垫注射B16F10黑色素瘤细胞,复制自发肿瘤转移模型,观察丹参素对自发转移模型中原发灶瘤重及肺肿瘤转移结节数的影响;采用免疫组化法检测丹参素对B16F10黑色素瘤原发灶组织中VEGF、MMP-2、MMP-9表达的影响。通过尾静脉注射B16F10黑色素瘤细胞,复制实验性肿瘤转移模型,观察丹参素对实验动物免疫器官及肺肿瘤转移节结数的影响。结果体外100μM丹参素具有促进B16F10黑色素瘤细胞增殖的作用,促进增殖率达17%,而0.01μM、0.1μM、1μM、10μM丹参素对B16F10细胞增殖无明显影响;丹参素能显著抑制B16F10细胞的侵袭和迁移,0.05μM、0.5μM、5μM丹参素抑制侵袭率分别达16%、37%、52%,0.5μM、5μM丹参素抑制B16F10细胞迁移率分别达59.4%、73.7%。Western blot结果表明,丹参素能显著抑制B16F10细胞中VEGF、MMP-2、MMP-9的表达。体外,100μM丹参素显著促进VEGF诱导的HUVEC增殖,促进增殖率为34%,5gM、50μM丹参素显著抑制VEGF诱导的HUVEC的迁移,抑制率为58.4%、75.4%。体外4μM、20μM丹参素能抑制VEGF诱导的HUVEC小管形成。体内,对自发转移模型,高剂量丹参素（40mg/kg/day）促进原发灶肿瘤增殖,促进增殖率达54.5%;但能有效抑制肺转移结节数;原发瘤切片进行免疫组化,结果显示,丹参素降低B16F10黑色素瘤组织中VEGF、MMP-2、MMP-9蛋白的表达。实验性转移模型结果显示,丹参素能提高动物胸腺指数,减少肺肿瘤转移结节数。结论体内外丹参素具有较强的抑制B16F10肿瘤细胞侵袭、迁移的能力,抑制相关蛋白VEGF、MMP-2、MMP-9表达,并且有促进机体免疫功能,这说明丹参素有可能降低癌细胞的恶性度,并且改善肿瘤与机体的微环境,提高机体对肿瘤细胞的识别,从而抑制肿瘤转移。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 英文缩略词
• 前言
• 第一部分 体外丹参素对B16F10黑色素瘤恶性生物行为的影响
• 1.实验材料
• 1.1 药品与试剂
• 1.2 实验器材
• 1.3 细胞株及培养条件
• 2.实验方法
• 2.1 MTS/PMS比色法测定丹参素对B16F10细胞增殖的影响
• 2.2 丹参素对B16F10细胞侵袭能力的影响
• 2.3 丹参素对B16F10细胞迁移能力的影响
• 2.4 Western blot法检测丹参素对B16F10细胞中VEGF、MMP-2、MMP-9表达的影响
• 2.5 统计分析
• 3.实验结果
• 3.1 高剂量丹参素促进B16F10细胞的增殖
• 3.2 丹参素抑制B16F10细胞的侵袭能力
• 3.3 丹参素抑制B16F10细胞的迁移能力
• 3.4 丹参素对B16F10细胞中VEGF、MMP-2、MMP-9表达的影响
• 4.讨论
• 第二部分 丹参素对VEGF诱导的HUVEC生物行为的影响
• 1.实验材料
• 1.1 药品与试剂
• 1.2 主要仪器
• 1.3 细胞株及培养条件
• 2.实验方法
• 2.1 MTS/PMS比色法测定丹参素对HUVEC细胞增殖的影响
• 2.2 丹参素对HUVEC细胞迁移能力的影响
• 2.3 丹参素对HUVEC细胞tube formation的影响
• 2.4 统计分析
• 3.实验结果
• 3.1 高剂量丹参素促进VEGF诱导的HUVEC增殖
• 3.2 丹参素抑制VEGF诱导的HUVEC迁移
• 3.3 丹参素抑制VEGF诱导的HUVEC tube formation
• 4.讨论
• 第三部分 丹参素对B16F10黑色素瘤自发转移模型的影响
• 1.实验材料
• 1.1 药品与试剂
• 1.2 实验器材
• 1.3 细胞株及培养条件
• 1.4 动物
• 2.实验方法
• 2.1 丹参素对B16F10自发性肿瘤转移模型的影响
• 2.2 免疫组化法检测丹参素对B16F10组织中VEGF、MMP-2、MMP-9表达的影响
• 2.3 统计分析
• 3.实验结果
• 3.1 丹参素对B16F10自发性肿瘤原发位瘤重及肺转移节结数的影响
• 3.2 丹参素对B16F10组织中VEGF、MMP-2、MMP-9表达的影响
• 4.讨论
• 第四部分 丹参素对B16F10黑色素瘤实验性转移模型的影响
• 1.实验材料
• 1.1 药品与试剂
• 1.2 实验器材
• 1.3 细胞株及培养条件
• 1.4 动物
• 2.实验方法
• 2.1 丹参素对B16F10实验性肿瘤转移模型的影响
• 2.2 统计分析
• 3.实验结果
• 4.讨论
• 结论与讨论
• 文献综述
• 参考文献
• 个人简介
• 致谢