大豆黄酮对雄性大鼠生殖器官的发育及阴茎海绵体性激素受体表达影响的研究

论文摘要

摘要:目的:探讨植物雌激素大豆黄酮（daidzein）对SD大鼠阴茎、睾丸和附睾生长、发育以及对大鼠阴茎海绵体性激素受体和由此所导致的对阴茎勃起功能的影响。方法:10周龄（成年早期）和4周龄（青春期）SD雄性大鼠各30只,分别分为5组:正常对照组、阳性对照组、低、中、高剂量大豆黄酮组,每组6只,分别给予生理盐水、0.1mg/d己烯雌酚（diethylstilbestrol,DES）、2mg、20mg、100mg/kg/d大豆黄酮灌胃,连续90d,观察体重的变化,比较各组大鼠的睾丸、附睾和阴茎指数,HE染色观察睾丸、附睾和阴茎组织结构的改变;对青春期的5组大鼠,测定血液中睾酮、LH和FSH的含量,制备阴茎冰冻切片,鬼笔环肽—TRITC染色,激光共聚焦显微镜观察阴茎组织平滑肌与胶原分布,RT-PCR方法观察各组大鼠阴茎海绵体性激素受体mRNA量的变化,免疫组化和WestemBlotting方法观察阴茎海绵体性激素受体表达的变化。结果:在成年期早期大鼠中,低、中和高剂量大豆黄酮组SD大鼠的体重及阴茎、睾丸和附睾指数与正常对照组均无显著差异（P均>O.05）。在青春期大鼠中,低、中、高剂量组的阴茎及附睾指数与正常对照组无显著差异（P>0.05）;高剂量组的睾丸指数（3.21±0.07）显著低于正常对照组（3.71±0.32）（P<0.01）,但中、低剂量组与正常对照组的差异无显著性（P>0.05）;中、低剂量组大鼠的体重与正常对照组无显著性差异（P>0.05）,而高剂量组的体重则显著低于正常对照组（P<0.05）;中、高剂量组大鼠血液中睾酮含量降低,阴茎组织平滑肌与胶原含量之比降低,与正常对照组差异有显著性（P<0.05）。青春期低、中和高剂量组大鼠的雄激素受体（androgenreceptor,AR）、雌激素受体α（estrogen receptorα,ERα）的表达没有明显改变;低剂量组大鼠雌激素受体β（estrogen receptorβ,ERβ）的表达也没有明显改变,但中、高剂量组的ERβ的表达量减少。HE染色结果显示青春期及成年早期大鼠摄入各剂量大豆黄酮对阴茎、附睾组织结构无明显影响,而摄入高剂量大豆黄酮可使青春期大鼠睾丸发育迟缓,出现不同程度生精障碍。结论:成年早期摄入大豆黄酮对大鼠的生殖器官没有明显的影响。但是青春期摄入高剂量（100mg/kg）的大豆黄酮对SD大鼠睾丸的生长发育有一定影响;低剂量大豆黄酮（2mg/kg体重）对青春期大鼠阴茎发育、平滑肌与胶原含量及勃起功能无明显影响,但摄入较高剂量（≥20mg/kg）的大豆黄酮可导致阴茎组织平滑肌与胶原含量比值降低,血液睾酮浓度降低,阴茎海绵体ERβ的表达量减少,从而影响阴茎的勃起功能。

论文目录

• 目录
• 摘要
• Abstract
• 前言
• 1. 雌激素与雌激素受体
• 2. 植物雌激素
• 3. 植物雌激素与雄性生殖
• 一、大豆黄酮对雄性SD大鼠生殖器官的生长发育的影响
• 1.材料和方法
• 1.1 实验动物
• 1.2 材料与试剂
• 1.3 试验方法
• 1.4 阿扑吗啡实验以及睾丸、附睾和阴茎湿重及指数的测定
• 1.5 睾丸、附睾和阴茎HE染色
• 1.6 阴茎冰冻切片的制备
• 1.7 阴茎F-肌动蛋白荧光染色及激光共聚焦观察
• 1.8 统计学处理
• 2.结果
• 2.1 大鼠体重增重情况
• 2.2 大鼠睾丸、附睾和阴茎的指数
• 2.2.1 成年早期大鼠
• 2.2.2 青春期大鼠
• 2.3 睾丸、附睾和阴茎HE染色结果
• 2.4 大豆黄酮作用后大鼠血液性激素含量的变化
• 2.5 青春期大鼠阴茎发育情况
• 2.6 青春期大鼠阴茎组织中平滑肌与胶原含量
• 3.讨论
• 3.1 大豆黄酮对雄性SD大鼠生殖器官生长发育的影响
• 3.2 大豆黄酮对青春期SD大鼠阴茎发育及勃起功能的影响
• 二、大豆黄酮对青春期SD大鼠阴茎海绵体性激素受体的影响
• 1.材料与方法
• 1.1 试验动物
• 1.2 材料与试剂
• 1.2.1 材料
• 1.2.2 实验器具
• 1.2.3 试剂的配制
• 1.3 试验方法
• 1.4 雌激素受体（ERα和ERβ）和雄激素受体（AR）PCR测定
• 1.4.1 抽提总mRNA
• 1.4.2 两步法RT-PCR
• 1.4.3 电泳
• 1.5 ERα、ERβ和AR的免疫组化分析
• 1.6 ERα、ERβ和AR的Western Blotting分析
• 1.6.1 蛋白质抽提
• 1.6.2 蛋白质定量
• 1.6.3 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳
• 1.6.4 转印蛋白质到PVDF膜上
• 1.6.5 膜的酶联免疫染色
• 1.6.6 分析结果
• 2.结果
• 2.1 ERα、ERβ和AR的PCR结果
• 2.2 ERα、ERβ和AR的免疫组化结果
• 2.3 ERα、ERβ和AR的Westem Blotting结果
• 3.讨论
• 全文小结
• 参考文献:
• 研究生期间发表论文
• 致谢