生长激素释放因子和垂体腺苷酸环化酶激活肽基因的共表达

论文题目: 生长激素释放因子和垂体腺苷酸环化酶激活肽基因的共表达

论文类型: 博士论文

论文专业: 生物化学与分子生物学

作者: 刘松财

导师: 张玉静,张永亮

关键词: 微球,真核表达,基因转染

文献来源: 吉林大学

发表年度: 2005

论文摘要: 生长激素释放因子(GRF)和垂体腺苷酸环化酶激活肽(PACAP)都是由下丘脑合成并分泌,是存在人和动物体内的生物活性物质,促进垂体生长激素(GH)的合成与分泌是其共有的生理功能。二者对提高动物的生长速度和畜牧业的发展具有重要意义。本研究人工合成了PACAP 和GRF 基因,构建了pIRES1-GRF-PACAP、pIRES1-PACAP、pIRES1neo -GRF 真核表达载体;三种真核表达载体在CHO 细胞瞬时表达,经RT-PCR、Dot-ELISA、Western blot 检测结果阳性,同时证明表达产物具有促进IGF-1 的分泌作用; 以PLGA 为载体,采用复乳-液中蒸发法制备了重组质粒微球,分别给小鼠和獭兔肌注质粒微球结果表明,实验组动物累积增重与生理盐水组比差异显著,GRF 和PACAP 双基因质粒微球组促生长效果优于单基因质粒微球组,双基因质粒微球组动物血清中IGF-1 的浓度高于生理盐水组和单基因组。以上实验结果表明,微球介导的双基因在提高动物体内IGF-1 浓度和生长速度方面明显优于生理盐水组,同时也高于单基因组,首次证明二者在体内具有协同促生长作用,为利用基因转染技术提高动物生产性能开辟了一条新途径。

论文目录:

前言

第一篇 文献综述

第一章 生长激素释放因子和垂体腺苷酸环化酶激活肽的结构与功能

第一节 生长激素释放因子的结构与功能

1 GRF 研究的兴起

2 GRF 的产生部位、生理作用及机理

3 GRF 的结构及结构与功能的关系

4 GRF 在畜牧业上的应用

5 GRF 的制备

第二节 垂体腺苷酸环化酶激活肽的结构与功能

1 PACAP 的发现

2 PACAP 基因

3 PACAP 的结构及其受体

4 PACAP 在体内的分布

5 PACAP 的作用机理

6 PACAP 的结构与功能的关系

7 PACAP 生物功能

8 PACAP 的应用前景

第二章 基因转染技术

1 基因转染的载体

2 基因转染的方法

3 肝脏的基因转染

4 肌肉组织的基因转染

5 促生长核酸生物制剂

第二篇 研究内容

第一章 GRF、PACAP、及GRF-PACAP 基因真核表达载体的构建

1 材料与方法

1.1 材料

1.2 方法

2 结果

2.1 pIRE51-PACAP 真核表达载体的构建

2.2 pIRE51-neo-GRF 真核表达载体的构建

2.3 pIRES-GRF-PACAP 真核表达载体的构建

3 讨论

3.1 GRF、PACAP 基因的设计和合成

3.2 PCR 反应系统的条件优选

3.3 真核表达载体的构建

3.4 PCR 快速筛选阳性菌落的方法

4 小结

第二章 重组质粒在 CHO 细胞中瞬时表达及检测

1 材料与方法

1.1 主要材料

1.2 方法

2 结果

2.1 三种重组质粒的制备

2.2 总 RNA 的提取

2.3 RT-PCR

2.4 CHO 表达GRF 的Dot-ELISA

2.5 CHO 表达PACAP 的Dot-ELISA

2.6 CHO 表达GRF 的Western blot

2.7 CHO 表达这PACAP 的Western blot

2.8 表达产物生学活性的测定

3 讨论

3.1 重组质粒的提取与纯化

3.2 GRF 和PACAP 在CHO 细胞的表达

3.3 表达产物的生物学活性

4 小结

第三章 微球介导的 GRF、PACAP 、GRF-PACAP 重组质粒在动物体内的表达

1 材料与方法

1.1 材料

1.2 方法

2 结果

2.1 质粒微球的制备

2.2 重组质粒微球对小鼠生长的影响

2.3 微球介导的重组质粒对獭兔生长的影响

3 讨论

3.1 关于质粒的大量制备

3.2 微球的制备

3.3 微球介导重组质粒在活体小鼠肌肉中的表达

3.4 微球介导重组质粒DNA 对小鼠、獭兔生长的影响

3.5 质粒注射部位、剂量、方式对动物生长的影响

3.6 重组质粒对动物血清IGF-I 浓度的影响

3.7 微球介导基因调控动物生长的优缺点

3.8 基因药物

4 小结

结论

参考文献

中文摘要

英文摘要

个人简历

致谢

发布时间: 2005-08-26

参考文献

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