论文摘要
目的:1建立生物样品中乙醇和自生醇类的直接进样和顶空进样气相色谱检测方法;2建立乙醇的死后再分布、保存检材中稳定性和自生醇类的研究模型和方法;3研究犬体内乙醇的死后再分布规律、保存检材中乙醇的稳定性和自生醇产生规律,为涉及酒精案件检材的采集、保存、检测和结果分析提供科学依据。方法:1乙醇及自生醇的气相色谱检测方法1.1直接进样气相色谱法:体液、组织（匀浆）离心后取上清,加入内标液,柱头直接进样,TRACE2000气相色谱仪（FID检测器,PEG融硅石英毛细管柱）检测乙醇及自生醇,保留时间定性,内标法定量。1.2顶空气相色谱法:取血样于顶空瓶中,加入内标液及蒸馏水,平衡后自动顶空进样器进样,Agilent6820气相色谱仪（FID检测器,DB-5毛细管柱）检测乙醇及自生醇,保留时间定性,内标法定量。2死后再分布研究2.1动物模型犬6只,分别于10min内经胃管灌入3.5ml/kg剂量的乙醇,1.5h后CO2处死。2.2样品采集与处理实验犬的心电、血压和呼吸全部消失后,置于室温下,分别于死后0、2、4、8、12、24、48、72、96、120h取左心室血、左心房血、右心室血、右心房血、下腔静脉血、玻璃体液、胆汁、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、大脑和肌肉,直接进样气相色谱法检测乙醇及正丙醇含量,同时观察是否有自生醇产生。3保存检材中乙醇的稳定性3.1模型死亡12h内人尸体血液,经检测无自生醇后,用乙醇溶液添加成初始浓度分别为20.12、51.73、77.9、142.29、314.05mg/100ml的样本。3.2样品保存与处理样本置于不同器皿（塑料袋,试管,注射器）中,分别于室温、4℃和—20℃中保存,在2、4、7、15、30天经顶空气相色谱法检测其中乙醇浓度。4保存检材中自生醇的研究4.1保存人血液中自生醇的研究离体模型:空白人尸体样本分别置于不同器皿（塑料袋,试管,注射器）中,室温、4℃和—20℃条件中保存,在2、4、7、15、30天经顶空气相色谱法检测乙醇和正丙醇含量,并观察其它自生醇的产生情况。4.2犬体内自生醇的研究在体模型:犬3只,经CO2处死,心电、血压和呼吸全部消失后,置于室温下,分别于死后0、2、4、8、12、24、48、72、96、120h取左心室血、左心房血、右心室血、右心房血、下腔静脉血、玻璃体液、胆汁、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、大脑和肌肉,每次取材后将肌肉,皮肤逐层缝合,尽量保持机体的完整性。上述检材经直接进样气相色谱法检测乙醇及正丙醇含量,并观察其它自生醇的产生情况。5统计学方法采用SPSS11.5统计软件处理数据,结果以均数±标准差（（?）±s）表示结果:1气相色谱法本研究建立的直接进样和顶空气相色谱检测生物样本中乙醇及自生醇（甲醇、丙酮、正丙醇、异丙醇、正丁醇和异丁醇）方法,使乙醇和自生醇分离良好,线性范围为2～400mg/100ml,最低检出浓度是0.15mg/100ml,回收率均在95%以上。2死后再分布研究2.1分布犬经灌胃后1.5h,体内乙醇含量顺序为玻璃体液（373.04±51.64）＞左心室血（266.52±39.47）、左心房血（275.67±52.29）、右心室血（255.06±35.28）、右心房血（277.65±28.91）、下腔静脉血（264.01±25.06）、尿（234.82±162.18）＞肝脏（162.01±5.45）、脾脏（177.07±43.35）、肺脏（199.70±29.28）、肾脏（203.27±34.20）、大脑（214.47±22.47）＞胆汁（169.27±52.74）＞肌肉（152.54±27.93）。玻璃体液中乙醇含量为心血和下腔静脉中乙醇含量的1.41倍;胆汁与心血和下腔静脉中乙醇含量之比为0.67。2.2死后再分布与0h相比,2、4、8、12、24、48、72、96h左心室、左心房、右心室、右心房血中乙醇浓度变化无统计学意义,120h时左心室、左心房血乙醇浓度显著升高,且均高于右心室和右心房血中乙醇浓度（P＜0.05）。玻璃体液中乙醇浓度在0～2h明显下降（P＜0.05）,2～72h变化无统计学意义。0～120h肌肉中乙醇浓度变化无统计学意义。3保存检材中乙醇的稳定性研究保存温度、器皿类型和初始浓度均对血样中乙醇浓度有不同程度的影响。不同初始浓度的变化趋势大致相同,15天后,初始浓度为314.05mg/100ml的样本变化趋势趋于降低,其他组变化微小。随着保存温度的升高,样本中乙醇浓度的下降速度增加。4℃保存时样品中乙醇浓度在15天内无显著变化（P＞0.05）,而-20℃保存的样品中乙醇浓度的变化均无显著性差异。塑料袋保存血中的乙醇浓度在第7天时就出现了明显的下降,而其他容器中乙醇浓度的变化趋势基本一致,在前15天变化平稳,之后有小幅度的下降,但均无显著性差异。4保存检材中自尘醇的研究4.1保存人血液中自生醇的研究室温保存大部分样本第7天时有少量乙醇、异丙醇、异丁醇和丙酮生成,30天也只有个别样本中检测出正丙醇;4℃保存样本在第30天时可检测到少量的乙醇;-20℃保存样本在30天时仍未检测到任何自生醇,4.2犬体内自生醇的研究大部分组织如心血、下腔静脉血、尿、胆汁、肝脏、脾脏、肺脏和肾脏在死后12h就有不同程度乙醇和正丙醇产生,其中,120h尿中乙醇浓度可以达104.92mg/100ml。肌肉,玻璃体液,大脑分别在死后48、72、96h检出乙醇。犬体内乙醇和正丙醇的生成存在正相关。结论:1本研究建立了生物样品中乙醇和自生醇类直接进样和顶空气相色谱检测方法,可使乙醇和自生醇达到良好分离,灵敏度高,可应用于酒精中毒的法医学研究和法医学鉴定。2醉酒剂量灌胃后1.5h,犬体内乙醇含量顺序为玻璃体液＞左心室血、左心房血、右心室血、右心房血、下腔静脉血、尿＞肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、大脑＞胆汁＞肌肉。玻璃体液中乙醇含量与心血和下腔静脉乙醇含量之比为1.41;胆汁与心血和下腔静脉中乙醇含量之比为0.63。3乙醇在灌胃犬体内可发生死后再分布现象,左心血受到很大影响,比较而言,玻璃体液、肌肉和脑组织受到死后再分布影响较少。且死亡犬体内会产生乙醇、正丙醇、丙酮和异丙醇。在酒精中毒案件的法医学鉴定中,应综合考虑死后再分布对体内酒精含量的影响。4保存温度,器皿类型和初始浓度均对血样中乙醇浓度有不同程度的影响,其中保存温度和器皿类型的影响较为显著。而且除了保存温度与保存时间不存在交互作用以外,其它因素两两之间都存在交互作用。鉴定人在保存和检测样本过程中只有加强各个环节的质量控制,才能提供客观准确的检测数据及保证复查结果的有效性。5在体模型和离体模型均会产生自生醇,温度对其影响较大。大部分组织如心血、下腔静脉血、尿、胆汁、肝脏、脾脏、肺脏和肾脏在死后12h就有不同程度的乙醇和正丙醇产生,其中,120h尿中乙醇浓度可以达104.92mg/100ml。肌肉,玻璃体液,大脑分别在死后48,72,96h检出乙醇,犬体内乙醇和正丙醇的生成存在正相关;人空白血样在-20℃放置30天未检出任何自生醇。在涉及乙醇的法医学检案中,特别是腐败样品,应注意自生醇的检测,尿中检出乙醇不能判定生前饮酒,应采集不易腐败的组织如玻璃体液、肌肉和大脑,检测其乙醇含量,并观察与正丙醇比例关系来进行综合判定。