论文摘要
目的:观察Th17型细胞因子IL-17、Th17细胞特异性转录因子RORγt及Th1型细胞因子IFN-γmRNA在P253-78肽段诱导的Lewis大鼠实验性自身免疫性神经炎(EAN)模型发病高峰期脾脏、淋巴结和坐骨神经中的表达,采用负载P258-73肽段的iMDC(P258-73aa-iMDC)进行干预,研究P258-73aa-iMDC对Th17/Th1细胞的影响,探讨P258-73aa-iMDC在诱导EAN抗原特异性的免疫耐受中的相关机制。方法:1.体外应用GM-CSF联合IL-10诱导骨髓来源DC前体细胞分化和扩增,培养第6天收集iMDC,以50μg/ml P258-73肽段负载于iMDC,获得负载P258-73肽段的iMDC(P258-73aa-iMDC)。2.28只清洁级Lewis大鼠,随机分为佐剂对照组、致病组、iMDC干预组和P258-73aa-iMDC干预组,每组7只。致病组用P253-78和完全弗氏佐剂免疫Lewis大鼠制成EAN动物模型。佐剂对照组只注射完全弗氏佐剂作为致病组的对照。iMDC干预组在免疫前皮下注射iMDC。P258-73aa-iMDC干预组在免疫前皮下注射P258-73aa-iMDC。观察实验动物的发病情况并按评分标准做EAN严重性的临床评估,于发病高峰期结束观察。3.实验终止时以3H-TdR掺入法检测淋巴细胞增殖反应。对坐骨神经进行病理学检查。用RT-PCR技术检测脾脏、淋巴结和坐骨神经中IL-17、RORγt、IFN-γmRNA的表达。结果:1.树突状细胞的体外培养培养6天的DC,流式细胞仪表型分析示CD11c+(66.13%±10.81%)、MHC-IIlow(40.03%±7.33%)CD80low(24.72%±4.13%)、和CD86low(18.61%±3.68%),证实所培养的细胞是iMDC。2.动物模型:P258-73aa-iMDC干预组的临床症状较致病组明显减轻。与致病组比较,P258-73aa-iMDC干预组的抗原特异性淋巴细胞增殖反应显著降低(P<0.01)。P258-73aa-iMDC干预组的坐骨神经的炎性细胞浸润和脱髓鞘改变较致病组明显减轻。3.IL-17、RORγt和IFN-γmRNA的表达与佐剂对照组比较,致病组、iMDC干预组和P258-73aa-iMDC干预组的IL-17、IFN-γmRNA在脾脏、淋巴结和坐骨神经中的表达均显著升高(P<0.01);与致病组比较,P258-73aa-iMDC干预组显著降低(P<0.01)。脾脏和淋巴结中的RORγt mRNA在各组的表达差异大致同IL-17和IFN-γ,但坐骨神经中,RORγt mRNA几乎无表达。结论:1.IL-17、RORγt和IFN-γ表达上调可能促进EAN发病。2.Th17/Th1细胞可能协同诱导EAN的发生与发展。3.P258-73aa-iMDC通过抗原特异性地抑制Th17/Th1细胞而减轻EAN的发病,可能是其诱导免疫耐受的机制之一。
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标签:实验性自身免疫性神经炎论文; 细胞论文; 免疫耐受论文;