转GFP青枯雷尔氏菌无致病力菌株对番茄青枯病免疫抗病效果的研究

论文摘要

细菌性青枯病是一种由青枯雷尔氏菌（Ralstonia solanacearum）引起的植物毁灭性病害,广泛分布于热带、亚热带及温带地区。青枯雷尔氏菌寄主广泛,可以侵染44个科数百种植物,对农业造成了重大的经济损失。青枯病的生物防治越来越引起大家的重视。本文观察比较了青枯雷尔氏菌无致病力菌株Rs-L.1.3- 020626-1A转GFP基因前后的菌落形态和单细胞形态;研究了无致病力菌株GFP-Rs- L.1.3-020626-1A对番茄组培苗的侵染特性,筛选出了最适侵染体系;研究了GFP-Rs- L.1.3-020626-1A对番茄组培苗青枯病的免疫抗病效果,并将其用于盆栽苗实验,初步研究了对番茄盆栽苗的免疫抗病效果。研究结果表明:无致病力菌株GFP-Rs-L.1.3-020626-1A以菌液浓度为104cfu/mL通过伤根法侵染番茄组培苗并将组培苗置于30℃培养的情况下,侵染效果较好,将这个体系应用于日后的研究中。GFP-Rs-L.1.3-020626-1A在组培苗内随着时间的推移菌含量不断增加,并没有出现像摇瓶培养时出现的平台期。不同的浸根时间对GFP-Rs- L.1.3-020626-1A在盆栽苗体内的含量影响不大。GFP-Rs-L.1.3-020626-1A在番茄盆栽苗体内的繁殖量远远低于在组培苗体内的繁殖量。GFP-Rs-L.1.3-020626-1A对延迟番茄组培苗青枯病发病时间以及降低发病率有显著的效果。GFP-Rs-L.1.3-020626-1A与强致病力菌株Rs-F.1.2-010618-07V以1∶1混合回接组培苗的各处理中,均表现出发病时间有推迟的现象,其中菌液浓度为104cfu/mL的处理在接菌后第8d开始有组培苗发病,比对照推迟了3d。GFP-Rs- L.1.3-020626-1A与Rs-F.1.2-010618-07V菌株菌液以不同配比接入番茄组培苗的各个处理之间差别不大。GFP-Rs-L.1.3-020626-1A与Rs-F.1.2-010618-07V菌株接入组培苗的时间间隔对青枯病的免疫抗病效果影响较大。当Rs-F.1.2-010618-07V比GFP-Rs-L.1.3-020626-1A早或同时接入,组培苗的发病时间由所延迟但发病率并没有明显降低。当GFP-Rs-L.1.3-020626-1A比Rs-F.1.2-010618-07V早接入,组培苗不仅发病时间有所延迟,发病率也显著降低。GFP-Rs-L.1.3-020626-1A比Rs-F.1.2-010618-07V早接入4d的处理发病时间为11d,比对照延迟了7d;早5d接入的处理中,发病率为6.52%,远低于对照的100%。将GFP-Rs-L.1.3-020626-1A用于番茄盆栽苗实验也能取得一定的免疫抗病效果,发病率为36.7%,低于对照组的73.3%。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 1 前言
• 1.1 细菌性青枯病的分布与危害
• 1.2 青枯雷尔氏菌的概况
• 1.2.1 青枯雷尔氏菌的形态及生理生化特征
• 1.2.2 青枯雷尔氏菌的选择性培养基
• 1.2.3 青枯雷尔氏菌的保存
• 1.3 细菌性青枯病的发生
• 1.3.1 青枯雷尔氏菌的致害特性
• 1.3.2 青枯病发生的土壤条件
• 1.3.3 青枯雷尔氏菌传染途径
• 1.3.4 青枯雷尔氏菌致病侵染方式
• 1.3.5 细菌性青枯病的流行规律与预测预报
• 1.4 细菌性青枯病防治方法
• 1.4.1 生物防治
• 1.4.2 农业防治
• 1.4.3 化学防治
• 1.5 绿色荧光蛋白（GFP）的应用
• 1.5.1 GFP 分子结构和发光机制
• 1.5.2 GFP 应用的优点
• 1.5.3 GFP 在跟踪观察微生物方面的应用
• 1.6 本论文的研究目的及意义
• 2 材料与方法
• 2.1 试验材料
• 2.1.1 菌株
• 2.1.2 培养基
• 2.1.3 番茄苗
• 2.1.4 设备仪器
• 2.2 微生物学试验基础方法
• 2.2.1 青枯雷尔氏菌平板培养
• 2.2.2 青枯雷尔氏菌液体摇床培养
• 2.2.3 菌体血球计数器法
• 2.2.4 平板菌落计数法
• 2.2.5 青枯雷尔氏菌的无菌水保存
• 2.2.6 青枯雷尔氏菌回接番茄苗的方法
• 2.3 试验方法
• 2.3.1 GFP-Rs-L.1.3-020626-1A 微生物学特性研究
• 2.3.2 GFP-Rs-L.1.3-020626-1A 侵染特性的研究
• 2.3.3 GFP-Rs-L.1.3-020626-1A 免疫抗病效果的研究
• 2.3.4 盆栽苗实验
• 3 结果与分析
• 3.1 GFP-Rs-L.1.3-020626-1A 微生物学特性研究
• 3.1.1 Rs-L.1.3-020626-1A 转GFP 基因前后菌落形态观察
• 3.1.2 青枯雷尔氏菌无致病力菌株转GFP 基因前后单细胞形态观察
• 3.2 GFP-Rs-L.1.3-020626-1A 侵染特性的研究
• 3.2.1 不同侵染浓度侵染效果的观察
• 3.2.2 侵染进程的测定
• 3.2.3 不同接菌方法侵染番茄组培苗效果的观察
• 3.2.4 温度对对番茄组培苗侵染的影响
• 3.2.5 侵染番茄组培苗菌量的消长动态
• 3.2.6 浸种时间对番茄组培苗侵染的影响
• 3.2.7 不同浸根时间侵染番茄盆栽苗效果的观察
• 3.3 GFP-Rs-L.1.3-020626-1A 免疫抗病效果的研究
• 3.3.1 强致病力菌株Rs-F.1.2-010618-07V 侵染番茄组培苗菌量消长动态
• 3.3.2 GFP-Rs-L.1.3-020626-1A 对番茄组培苗青枯病的免疫抗病效果
• 3.4 盆栽苗实验
• 3.4.1 不同强致病力菌株和接菌方法对番茄盆栽苗侵染动态的比较
• 3.4.2 GFP-Rs-L.1.3-020626-1A 对番茄盆栽苗免疫抗病效果的观察
• 4 结论与讨论
• 4.1 GFP-Rs-L.1.3-020626-1A 的侵染特性
• 4.2 Rs-F.1.2-010618-07V 侵染番茄组培苗菌量消长动态
• 4.3 GFP-Rs-L.1.3-020626-1A 对番茄组培苗青枯病的免疫抗病效果
• 4.4 强致病力菌株不同菌株和接菌方法对番茄盆栽苗侵染动态的比较
• 4.5 GFP-Rs-L.1.3-020626-1A 对番茄盆栽苗青枯病的免疫抗病效果
• 4.6 展望
• 参考文献
• 致谢